[发明专利]一种聚乙烯醚软脂酸双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术

摘要

一种聚乙烯醚软脂酸双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术，属于生化分离工程技术领域。本发明步骤为聚乙烯醚软脂酸的制备；双水相萃取藻蓝蛋白；藻蓝蛋白水溶液进浓缩和冷冻干燥后获得藻蓝蛋白粉；蛋白回收率可达85～90％。该方法简单，对螺旋藻破壁液直接使用聚乙烯醚软脂酸进行富集分离，简化了纯化过程的步骤，选择性高，分离得到的藻蓝蛋白的光谱纯度达到A620/A280>3.2。原料可采用螺旋藻鲜藻或干藻粉，从而提供了一种解决螺旋藻资源高值规模化利用的技术方法。

主权项

一种聚乙烯醚软脂酸双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术，其特征在于步骤为：聚乙烯醚软脂酸的制备；双水相萃取藻蓝蛋白；藻蓝蛋白水溶液经浓缩和冷冻干燥后获得藻蓝蛋白粉。(1)聚乙烯醚软脂酸的制备：在圆底烧瓶中放入聚乙二醇、三乙胺、甲苯，三乙胺与聚乙二醇的重量比为0.02～0.05:1，甲苯与聚乙二醇的重量比为4～8:1，搅拌均匀，再加入1％软脂酸乙醚溶液，软脂酸与聚乙二醇的重量比为0.005～0.05:1，在加热回流和磁力搅拌条件下滴加乙二酰氯反应0.5～2小时，乙二酰氯与聚乙二醇的重量比为0.1～0.5，然后将反应混合物冷却到4℃，沉淀析出聚乙烯醚软脂酸。(2)两相萃取：在螺旋藻破壁清液中加入聚乙烯醚软脂酸和无机盐，聚乙烯醚软脂酸:无机盐:破壁清液的重量比为0.05～0.25:0.2～0.35:1，震荡混合2分钟，静置分相，藻蓝蛋白富集于上相。(3)将上述含藻蓝蛋白的上相经截留分子量为30000道尔顿的超滤膜过滤，去除聚乙烯醚软脂酸和无机盐，获得藻蓝蛋白水溶液，纯度为2.8～3.7，蛋白浓度为3.15～5.6mg/ml。(4)将藻蓝蛋白水溶液在60℃下真空浓缩至原体积三分之一，冷冻干燥后得到藻蓝蛋白粉末。