[发明专利]一种十八烷基聚乙烯醚双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术

摘要

一种十八烷基聚乙烯醚双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术，属于海产品加工分离工程技术领域。本发明步骤为：十八烷基聚乙烯醚的制备；双水相萃取藻蓝蛋白；藻蓝蛋白水溶液经浓缩和冷冻干燥后获得藻蓝蛋白粉；蛋白回收率可达75～87％。该方法简单，对螺旋藻破壁液直接使用十八烷基聚乙烯醚进行富集分离，简化了纯化过程的步骤，选择性高，分离得到的藻蓝蛋白的光谱纯度达到A620/A280>2.4。原料可采用螺旋藻鲜藻或干藻粉，从而提供了一种解决螺旋藻资源高值规模化利用的技术方法。

主权项

一种十八烷基聚乙烯醚双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术，其特征在于步骤为：十八烷基聚乙烯醚的制备；双水相萃取藻蓝蛋白；藻蓝蛋白水溶液经浓缩和冷冻干燥后获得藻蓝蛋白粉。(1)十八烷基聚乙烯醚的制备：在圆底烧瓶中放入重量百分比为2％～8％的叔丁醇钾苯溶液，在氮气保护下逐滴加入重量百分比为25％～50％的聚乙二醇苯溶液，叔丁醇钾与聚乙二醇的重量比为0.04～0.1:1，在室温下搅拌1～3小时，然后加入重量百分比为15％～30％的十八烷基溴苯溶液，十八烷基溴与聚乙二醇的重量比为0.22～0.5:1，在室温下搅拌反应72～108小时，过滤后将滤液在真空下蒸馏1～3小时获得十八烷基聚乙烯醚。(2)双水相萃取：在螺旋藻破壁清液中加入十八烷基聚乙烯醚和无机盐，十八烷基聚乙烯醚:无机盐:破壁清液的重量比为0.05～0.35:0.25～0.4:1，震荡混合2分钟，静置分相，藻蓝蛋白富集于上相。(3)将上述含藻蓝蛋白的上相经截留分子量为30000道尔顿的超滤膜过滤，去除十八烷基聚乙烯醚和无机盐，获得藻蓝蛋白水溶液，纯度为2.4～4.2，蛋白浓度为4.15～6.6mg/ml。(4)将藻蓝蛋白水溶液在60℃下真空浓缩至原体积三分之一，冷冻干燥后得到藻蓝蛋白粉末。