[发明专利]一种间充质干细胞细胞因子的制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种间充质干细胞细胞因子的制备方法，包括以下步骤(1)提取间充质干细胞；(2)培养；(3)低氧条件下继续培养；(4)用0.25％胰酶‑EDTA溶液消化；(5)离心，用0.9％生理盐水清洗；(6)用0.9％生理盐水调整细胞浓度，再添加1‑3mg/mL的EDTA和5‑10mg/mL的Vc；(7)冻融；(8)离心，过滤。本发明制备的产品可有效解决现有技术中人工方法配制的细胞因子组合物无法模拟细胞微环境所含的细胞因子种类及配比，使用时出现不良反应的问题。

主权项

一种间充质干细胞细胞因子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)通过组织贴壁或酶消化法提取间充质干细胞，然后对提取的间充质干细胞进行各指标检测；(2)将检测合格的间充质干细胞接种于培养容器中，加入培养基，然后置于37℃、5％CO2条件下进行培养；其中培养基成分：体积浓度为2％的GlutaMAXTM‑I和体积浓度为10‑20％的FBS，其余为DMEM；(3)待细胞融合度达到80‑90％时，将培养容器中的氧浓度调整至0.5‑2％(v/v)，然后继续培养细胞过夜；(4)将步骤(3)中培养好的细胞用0.25％胰酶‑EDTA溶液消化2‑3min；(5)消化完毕后，将其置于20℃，1000‑2000r/min条件下离心2‑3min，然后去掉上清液，用0.9％生理盐水清洗沉淀2‑3次；(6)用0.9％生理盐水调整步骤(5)中细胞浓度至1‑10×107个细胞/mL，然后再加入1‑3mg/mL的EDTA和5‑10mg/mL的Vc，混匀；(7)将步骤(6)所得细胞分装入冻存管中，置于气相液氮中冻存10‑30min，然后放置于37℃水浴锅中复苏5‑10min，再置于气相液氮中冻存10‑30min，放置于37℃水浴锅中复苏5‑10min，此操作反复进行3‑5次；(8)将步骤(7)所得细胞置于20℃，4000‑10000r/min条件下离心5‑10min，然后用0.22μm过滤器过滤，得间充质干细胞细胞因子。