[发明专利]一种同时检测多种病原体的五重PCR检测方法在审
| 申请号： | 201611110727.0 | 申请日： | 2016-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN106520986A | 公开（公告）日： | 2017-03-22 |
| 发明（设计）人： | 王俊霞;郑龙;祝岩波;尤红煜;连伟光;刘健敏;张东明 | 申请（专利权）人： | 河北医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12Q1/14 |
| 代理公司： | 石家庄新世纪专利商标事务所有限公司13100 | 代理人： | 董金国 |
| 地址： | 050017 河*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种同时检测多种病原体的五重PCR检测方法。首先筛选出具有金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、多杀巴氏杆菌、支气管败血性波氏杆菌和肺支原体的保守性序列的基因，作为PCR检测的靶点，分别合成扩增对应保守序列的特异性引物，将5对引物同时放在一个PCR反应体系中，通过各项优化，建立直接从样本中一次性检测五种病原体的五重PCR检测方法。较常规的PCR检测方法，本发明的检测方法具有快速、灵敏、简便、准确的特点，降低了对检测人员的要求和检测成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 同时 检测 多种 病原体 pcr 方法 | ||
【主权项】：
一种同时检测多种病原体的五重PCR检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）筛选出具有金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、多杀巴氏杆菌、支气管败血性波氏杆菌和肺支原体的保守性序列的基因，作为PCR检测的靶点，分别合成扩增对应保守序列的特异性引物；（2）将5对引物同时放在一个PCR反应体系中，扩增出目的基因片段；（3）通过琼脂糖凝胶电泳检测鉴定PCR扩增产物；其中，扩增金黄色葡萄球菌上游引物的序列如表1 a所示，下游引物的序列如表1 b所示；扩增绿脓杆菌上游引物的序列如表1 c所示，下游引物的序列如表1 d所示；扩增肺支原体上游引物的序列如表1 e所示，下游引物的序列如表1 f所示；扩增多杀巴氏杆菌上游引物的序列如表1 g所示，下游引物的序列如表1 h所示；扩增支气管败血性波氏杆菌上游引物的序列如表1 i所示，下游引物的序列如表1 j所示；。
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