[发明专利]从红花醡浆草上分离高粱茎点霉的方法及该霉的应用

摘要

本发明公开了一种从红花醡浆草上分离高粱茎点霉的方法及该霉应用，分离方法为采集罹病的红花醡浆草，水冲洗后在病健交界处剪大小为5×5mm的组织；将组织依次浸入酒精和质量分数为5％的次氯酸钠溶液中，最后用灭菌水冲洗3次，并放在PDA培养基上培养；将不同形态的菌落分别转接至新的PDA培养基上进行培养并重复纯化；本发明通过提出从发病的红花醡浆草上分离高粱茎点霉的方法，并通过设计引物，结合形态学特征鉴定该菌为高粱茎点霉；采用该菌进行对红花醡浆草的防效实验，检测得出该菌在浓度1×106‑1×109conidia/ml时对红花醡浆草防效在80％以上，证明从罹病红花醡浆草中提取得到的高粱茎点霉能有效应用于对红花醡浆草的防治领域。

主权项

一种从红花醡浆草上分离高粱茎点霉的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)分离：1.1)采集罹病的红花醡浆草，先用自来水冲洗表面；在病健交界处剪大小5×5mm组织若干块；1.2)将步骤1.1)中剪切的组织依次浸入酒精中30s，浸入质量分数为5％的次氯酸钠溶液中45s，最后用灭菌水冲洗3次，并放在PDA培养基上在28℃培养箱中黑暗培养5天；1.3)将步骤1.2)中培养得到的不同形态的菌落分别转接至新的PDA培养基上进行培养纯化，并重复纯化2‑3次；2)形态学鉴定：将步骤1.3)中纯化好的菌落用直径0.5cm的打孔器打下菌饼放在PDA培养基上，在28℃培养箱中黑暗培养7天，每天观察菌落特征，包括形态、颜色、质地，菌丝和分子孢子形态；3)分子生物学鉴定：采样试剂盒提取步骤2)中菌落的DNA，首先使用ITS通用引物,进行PCR，PCR后进行胶回收测序，测序结果提交NCBI，Genbank号分别为：KX758542；根据ITS测序结果为茎点霉属(Phoma sp.)，根据该属的保守序列设计引物LSU和TUB设计2对引物，进行PCR，PCR后进行胶回收测序，测序结果提交NCBI，Genbank号分别为：KY000557、KY000558。