[发明专利]基于核酸适体和细胞穿模肽的载带药物或纳米颗粒进入特定靶标细胞的方法

摘要

本发明涉及一种基于核酸适体和细胞穿模肽的载带药物或纳米颗粒进入特定靶标细胞的方法，包括制备二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇修饰的细胞穿膜肽、制备包裹药物或纳米颗粒及细胞穿膜肽TAT的脂质体和脂质体上连接核酸适体。该方法通过利用脂质体载带药物或纳米颗粒，并在脂质体上修饰适合的核酸适体及细胞穿模肽，提高药物的递送和靶向治疗，为疾病诊断治疗提供了有效的手段，具有广阔的应用前景。利用脂质体载带药物或纳米颗粒，增强了药物或纳米颗粒的生物相容性，提高了肿瘤细胞对药物或纳米颗粒的摄取率。方法简单，易于修饰，所用材料天然易得，在体内易于降解，生物相容性好。

主权项

一种基于核酸适体和细胞穿模肽的载带药物或纳米颗粒进入特定靶标细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇修饰的细胞穿膜肽：聚乙二醇修饰的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺（DSPE‑PEG 2000‑Mal）与半胱氨酸修饰的细胞穿膜肽以一定比例溶解于含有三乙基胺的氯仿/甲醇溶液中，其v/v=2:1，黑暗条件下于25℃孵育24 hr；随后真空干燥除去多余的有机溶剂，沉淀物重新溶于氯仿中；采用孔径0.02 μm滤膜过滤溶液后，将溶液重新真空干燥除去有机溶剂，所得沉淀物于‑20℃保存待用；（2）制备包裹药物或纳米颗粒及细胞穿膜肽TAT的脂质体：称取一定质量的磷脂、胆固醇、DSPE‑PEG 2000修饰的细胞穿膜肽，将以上材料溶解于氯仿中，待搅拌均匀后，加入流通的氮气吹干，并于真空干燥除去残余的有机溶剂；待完全干燥后，加入含有药物等物质的磷酸盐缓冲溶液（PBS）使单层磷脂水化，磷酸盐缓冲溶液pH=7.4；采用带有一定孔径滤膜的挤压器挤压多次，即可得到包裹有待载带物的脂质体；（3）脂质体上连接核酸适体：PBS溶解的核酸适体DNA 在95℃孵育10 min，置于冰盒上孵育 15 min，使核酸适体形成三维结构，将已形成好结构的核酸适体与脂质体以一定比例混合，通过某种化学等作用将核酸适体连接到脂质体上，随后除去多余的核酸适体。