[发明专利]一种项头孢霉菌原生质体的制备方法

摘要

一种项头孢霉菌原生质体的制备方法，包括以下步骤将纤维素酶、蜗牛酶和溶壁酶溶于渗透压缓冲剂中，经0.22微米微孔滤膜过滤除菌，4℃保存待用；用生理盐水洗下顶头孢霉孢子，接种于CSL培养基50ml250m1摇瓶中，28℃条件下振荡220r/min培养4d；本发明所述方法制备的项头孢霉菌原生质体，可有效获得较多量的生质体、活性很好，再生率很高。

主权项

一种项头孢霉菌原生质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将纤维素酶、蜗牛酶和溶壁酶溶于渗透压缓冲剂中，经0.22微米微孔滤膜过滤除菌，4℃保存待用；（2）用生理盐水洗下顶头孢霉孢子，接种于CSL培养基50ml250m1摇瓶中，28℃条件下振荡220r/min培养4d；（3）然后转接于YPS培养基50ml250ml摇瓶中，28℃条件下振荡220r/min培养18h；（4）取菌液50ml离心6600xg10min收集菌体；准确称取菌丝体1g湿重，用无菌水洗涤3次，离心收集菌体，重悬于10mmol/LDTT溶液10ml中，30‑50℃条件下振荡250r/min孵育1h进行预处理；取该预处理液离心6600×g5min收集菌体，用渗透压缓冲剂洗涤3次6600×g，5min，弃去上清液；然后加入不同酶解液各10ml，30℃条件下振荡100r/min孵育2～3h；镜检直至大多数菌丝开始释放原生质体；（5）加入4倍体积的渗透压缓冲剂终止反应，用四层擦镜纸过滤除去菌丝；离心950×g5min收集原生质体，用渗透压缓冲剂5ml洗涤后再次离心，将原生质体重悬于渗透压缓冲剂0．5ml中；（6）将悬浮液用渗透压缓冲剂稀释100倍后，即得。