[发明专利]一种温度可控的电化学DNA生物传感器及其制备方法

摘要

本发明提供了一种温度可控的电化学DNA生物传感器及其制备方法。将与一段目标DNA序列互补的巯基化的单链DNA固定在金丝热电极表面作为捕获探针，与目标DNA互补以后，形成带有3’平端的双链结构，诱导外切酶III从双链结构的3’平端由3’端向5’端对捕获探针消解，目标DNA被释放，并与其他捕获探针进行新的杂交切酶循环，最终电极表面捕获探针数量明显减少。酶切循环过程前后电极表面捕获探针对检测液中三氯化六氨合钌的电化学吸附信号的减少程度与DNA浓度对数成线性关系，即可实现对目标DNA的检测。本发明提供的检测方法对目标DNA的检测具有检测时间短，灵敏度高，检测线低，选择性好的特点。

主权项

1.一种温度可控的电化学DNA生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）设计一条捕获探针DNA链CP，所述DNA链CP与目标DNA链TP互补配对；CP链的5’端巯基化；捕获探针DNA链CP的DNA序列为：5’‑SH‑(CH₂)₆–TTTTC TGTGC GCCGG TCTCT CCCA‑3’，目标DNA链TP的序列为：5’‑TGGGA GAGAC CGGCG CACAG AGGAA G‑3’；（2）将金丝热电极打磨抛光成镜面，经二次蒸馏水超声清洗，干燥，得处理后的金丝热电极；（3）将含有巯基化捕获探针DNA链CP的缓冲溶液滴加在步骤（2）中处理好的金丝热电极上，再用巯基己醇对电极表面残余位点进行封闭，得到巯基化捕获探针CP修饰的金丝热电极；（4）步骤（3）中得到的电极浸泡在含有不同浓度目标DNA链TP和核酸外切酶Ⅲ缓冲液中进行杂交酶切循环，反应结束后得到电化学DNA生物传感器；所述步骤（4）中，核酸外切酶Ⅲ浓度为1～5μ/μL，杂交酶切循环反应温度为0～40℃，反应时间为0.25～2h；步骤（3）中，CP的浓度为1～2μM；修饰温度为20～25℃；修饰时间为1.5～2.5h；巯基己醇浓度为0.1～4mM。