[发明专利]一种用于昆虫蛋白质定量和示踪的N15稳定同位素标记方法

摘要

本发明公开了一种用于昆虫蛋白质定量和示踪的N15稳定同位素标记方法，首先，利用酵母将N15无机盐转化成生物蛋白，当酵母培养代数达到6代以上，其提取蛋白98％以上都是N15的蛋白，再将酵母磨碎，制成含N15的菌体蛋白粉末，利用含N15的菌体蛋白粉末取代常规的N14蛋白，用于培养多种昆虫，为昆虫蛋白质标记定量和示踪提供特异性的N15同位素标记。本发明方法可应用于昆虫的蛋白质定量分析，操作简便，试验成本低，试验周期短，利于人们高效、低成本对大量样品进行蛋白质组分析。

主权项

一种用于昆虫蛋白质定量和示踪的N15稳定同位素标记方法，其特征在于：首先，利用酵母将N15无机盐转化成生物蛋白，当酵母培养代数达到6代以上，其提取蛋白98％以上都是N15的蛋白，再将酵母磨碎，制成含N15的菌体蛋白粉末，利用含N15的菌体蛋白粉末取代常规的N14蛋白，用于培养多种昆虫，为昆虫蛋白质标记定量和示踪提供特异性的N15同位素标记；其包括以下步骤：1)按照以下配方配制只含N15的无机培养基：在1升的蒸馏水中，包含以下按质量百分比计的组分：2)使用高压灭菌锅，将步骤1)中的培养基灭菌；3)待步骤2)中的培养基冷却至室温后，挑取单菌落酵母菌接种在培养基中进行培养；4)待酵母菌培养代数达到6代以上，取出培养基，室温中静置至酵母菌体完全沉底，倒出液体培养基并舍弃，得到酵母菌体；5)用已灭菌的生理盐水或缓冲液洗涤酵母菌体，并使用布氏漏斗抽滤；6)收集到的菌体称重后，与缓冲液以1:1～1.5的比例混合成新的菌液，缓慢加入到液氮中，使得菌液进入液氮中形成小颗粒，将菌体液氮颗粒加入高速破碎机中破碎，得到粉末状的菌体；7)将菌体粉末倒出，用水浴融化后，再次注入到液氮中，重复步骤6)；8)将步骤7)中的菌体粉末融化后，放入高速离心机中离心，离心后，上清液含有酵母菌蛋白质，收集上清液，舍弃沉淀；9)含有蛋白质的液体装入透析袋中，使用流动水透析，洗脱其中的无机盐；10)透析后的液体先预冻，凝结成固体后，再放入冷冻干燥机中干燥，得到菌体蛋白粉末；11)N15昆虫饲料的配制：将步骤10)中制成的菌体蛋白粉末作为饲料的基本蛋白源，取代常规的N14蛋白用于培养，再加入不含N元素的糖类和其它无机盐物质，制成最终的N15昆虫饲料。