[发明专利]一种分离番茄果实原生质体的方法

摘要

本发明公开了一种分离番茄果实原生质体的方法。本发明提供了一种分离番茄果实原生质体的方法，包括如下步骤：1)用酶液酶解番茄果实，收集酶解后果实组织；所述酶液包括纤维素酶、果胶酶、离析酶；2)将所述酶解后果实组织在PME溶液中孵育，实现番茄果实原生质体的分离，即得到番茄果实原生质体；采用本发明提供的方法对番茄果实原生质体进行分离，原生质体得率显著提高；纤维素酶等的用量减少，达到节省成本的目的；为深入研究果实发育相关基因表达模式提供了重要工具。由此可见，酶解处理结合温和消化技术对番茄果实原生质体进行分离的方法为果实发育相关蛋白的亚细胞定位以及基因表达模式的深入研究奠定了基础，实际应用价值高。

主权项

1.一种分离番茄果实原生质体的方法，包括如下步骤：1）用酶液酶解番茄果实，收集酶解后果实组织；2）将所述酶解后果实组织在PME溶液中孵育，即得到番茄果实原生质体，实现番茄果实原生质体的分离；所述PME溶液由300‑500 mM甘露醇、40‑60 mM PIPES、10‑30 mM MgCl₂、10‑30 mM EDTA和水组成；所述酶液为由纤维素酶、果胶酶、离析酶和GKMMB溶液组成，所述纤维素酶在所述酶液中的质量百分比为0.5‑1%，所述果胶酶在所述酶液中的质量百分比为0.3‑0.5%、所述离析酶在所述酶液中的质量百分比为0.3‑0.5%；或，所述GKMMB溶液由终浓度为300‑500 mM甘露醇、10‑30 mM KCl、40‑60 mM MgSO₄7H₂O、1‑3 mM MgCl₂、50‑150 mM MES、质量百分含量为1‑3% BSA和水组成。