[发明专利]基于多重PCR的二代测序建库技术在审
| 申请号： | 201611145969.3 | 申请日： | 2016-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN106498504A | 公开（公告）日： | 2017-03-15 |
| 发明（设计）人： | 王筱恬;徐峰 | 申请（专利权）人： | 上海美迪维康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200131 上海市浦东新区中国*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，特别涉及二代测序文库构建技术。该方案中利用两轮多重PCR来建库。针对每个靶标区域或者靶标位点，设计两条特异性引物，上游的引物OP用于第一轮多重PCR，下游的引物IP用于第二轮多重PCR。将第二轮PCR产物纯化后，进行Q‑PCR定量，稀释到合适的浓度用于二代测序。本发明能够有效的缩短Ampliseq试剂盒存在的问题，对于客户定制化的panel设计生产周期只需要两周，并降低单个样本建库的成本，且Ion Torrent和Illumina测序平台都通用。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 多重 pcr 二代 测序建库 技术 | ||
【主权项】：
二代测序文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，将样本DNA进行片段化处理，随后每个片段两端加上特殊的接头；步骤2，加入第一轮扩增的上游引物混合池，与特殊接头互补的通用引物配制成PCR总体系，进行第一轮扩增；步骤3，将第一轮PCR产物纯化后，加入第二轮扩增的下游引物混合池，与第二步中使用过的特殊接头互补的通用引物配制成PCR总体系，进行第二轮扩增；步骤4，将第二轮PCR产物纯化后，配制反应总体系，进行Q‑PCR定量，稀释到合适的浓度，即可用于二代测序。
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