[发明专利]一种野西瓜硒多糖的制备方法

摘要

一种野西瓜硒多糖的制备方法。本发明涉及一种野西瓜硒多糖的制备方法。本发明目的是为了解决目前野西瓜多糖抗肿瘤活性低的问题。方法：一、野西瓜多糖的提取；二、野西瓜粗多糖的制备；三、野西瓜粗多糖除蛋白；四、野西瓜粗多糖除色素及小分子；五、野西瓜多糖醇沉；六、野西瓜多糖精提；七、野西瓜多糖的硒化。本发明的制备方法简单易操作，成本低，所得硒多糖Se‑CSPS可显著抑制肿瘤生长，抑制率高达61.08％。

主权项

1.一种野西瓜硒多糖的制备方法，其特征在于一种野西瓜硒多糖的制备方法按以下步骤进行：一、野西瓜多糖的提取：将野西瓜干燥，然后加入95％的乙醇进行醇沉，醇沉3次，干燥后得到醇沉淀多糖；其中醇沉温度为80～100℃，醇沉时间为2h～4h；二、野西瓜粗多糖的制备：向步骤一得到的醇沉淀多糖中加水进行萃取，对萃取液脱水，然后依次用无水乙醇、丙酮和苯洗脱，干燥后得到多糖含量为80％的野西瓜粗多糖；三、野西瓜粗多糖除蛋白：①将步骤二得到的多糖含量为80％的野西瓜粗多糖用蒸馏水溶解，配成饱和粗多糖水溶液Ⅰ；②向饱和粗多糖水溶液Ⅰ中加入质量为饱和粗多糖水溶液Ⅰ质量1％的木瓜蛋白酶，在温度为50～70℃的水浴条件下酶解反应1.5h～2.5h，酶解反应后置于沸水中灭活8min～12min，然后加入氯仿和正丁醇的混合液，震荡15min～25min，转至分液漏斗中静置25min～35min，除去水相与有机相之间的白色蛋白，得到剩余水相；③对剩余水相重复步骤②的操作至水相与有机相之间无白色蛋白，得到待浓缩水相；④对待浓缩水相进行浓缩，浓缩至原体积的40％～60％，得到浓缩后水相，然后加入4倍浓缩后水相体积的无水乙醇沉淀过夜，再依次用无水乙醇、丙酮和石油醚洗涤，干燥后得除蛋白野西瓜粗多糖；所述氯仿和正丁醇的混合液中氯仿与正丁醇的体积比为4:1；四、野西瓜粗多糖除色素及小分子：将步骤三得到的除蛋白野西瓜粗多糖用蒸馏水溶解，配成饱和粗多糖水溶液Ⅱ，然后加入氨水调节pH值至8～9，再加入过氧化氢，调节过氧化氢体积分数为饱和粗多糖水溶液Ⅱ体积的10％，然后置于温度为50～70℃的水浴条件下加热反应1.5h～2.5h，冷却后装入透析袋，先流水透析3天，再用蒸馏水透析1天后取出，然后在转速为3000r/min～4000r/min的条件下离心8min～12min，除去沉淀后将溶液浓缩至原体积的40％～60％，得到脱出色素及小分子的野西瓜粗多糖浓缩液；五、野西瓜多糖醇沉：将无水乙醇加入至步骤四得到的脱出色素及小分子的野西瓜粗多糖浓缩液中，沉淀静置过夜，离心分离得到多糖沉淀，然后依次无水乙醇、丙酮和石油醚洗涤多糖沉淀，干燥后，得到醇沉后野西瓜多糖；步骤五中所述无水乙醇与步骤四得到的脱出色素及小分子的野西瓜粗多糖浓缩液的体积比为10:100；六、野西瓜多糖精提：采用DEAE‑52柱对步骤五得到的醇沉后野西瓜多糖进行层析，然后用4倍柱体积的浓度为0.1mol/L的NaCl溶液作为洗脱剂进行洗脱，NaCl溶液流速为20mL/3min，收集洗脱液先用流水透析3天，再用蒸馏水透析至无Cl‑后冷冻干燥，得到野西瓜多糖，即CSPS；七、野西瓜多糖的硒化：将步骤六得到的CSPS和Na2SeO3溶于0.5％硝酸水溶液中，混匀后得到混合液，然后将装有混合液的三角烧瓶密封置于水浴中，在温度为60～70℃和转速为35r/min～45r/min的条件下反应6.5h～7.5h，反应完成后使其冷却，然后用无水Na2CO3调节反应溶液的pH值至5～6，再用离心机在3000r/min～4000r/min的条件下离心8min～12min，将离心后的上清液置于透析袋中，流水透析至游离HSeO3‑去除完全，然后将透析液浓缩至原体积的40％～60％，真空冷冻干燥后得到野西瓜硒多糖，即Se‑CSPS；所述CSPS与Na2SeO3的质量比为1∶0.7～0.9；所述混合液中CSPS的浓度为0.008g/mL～0.012g/mL。