[发明专利]利用组培苗叶片再生不定芽快速繁育羊踯躅的方法

摘要

本发明属于农业生物技术领域，涉及一种利用组培苗叶片再生不定芽途径快速繁育羊踯躅的方法；本发明以羊踯躅无菌组培苗顶生第三到第五个叶片做为外植体，对叶片垂直于主脉切割一刀并去除叶柄和叶稍，接种在附加激素TDZ 1.0 mg/L和IAA 1.0 mg/L的WPM培养基上，暗培养10‑15天后进行光照培养，光照培养35天时叶片不定芽诱导率达85%以上，不定芽诱导数平均为7.2个/叶片。在添加ZT 1.0 mg/L和IBA 0.1‑0.5 mg/L的WPM培养基上不定芽生长形成幼苗，幼苗在附加IBA 10‑12.5 mg/L和NAA 0.1mg/L的1/2 WPM培养基上发育成具有根、茎、叶的完整小植株，成株率达95%以上；本方法适用于羊踯躅试管苗工厂化生产及农杆菌介导的遗传转化体系的建立。

主权项

1.一种利用组培苗叶片再生不定芽快速繁育羊踯躅的方法，其特征在于，具体步骤如下：A）剪取羊踯躅无菌组培苗顶生第三到第五个叶片，对叶片垂直于主脉切割一刀并去除叶柄和叶梢；B）将叶片置于不定芽诱导培养基上，暗培养10‑15天后进行光照培养；C）光照培养35天后，将带不定芽的叶片转到不定芽生长培养基上进行继代培养，30 d后形成幼苗；D）将幼苗切下，转移到成苗和生根培养基上，30 d后，幼苗发育成具有根、茎、叶的完整再生植株；各步骤培养基配方如下：不定芽诱导培养基：WPM培养基中加入终浓度为1.0 mg/L的细胞分裂素噻苯隆、终浓度为1.0 mg/L的生长素吲哚乙酸、终浓度为30 g/L的蔗糖；不定芽生长培养基：WPM培养基中加入终浓度为1.0 mg/L的细胞分裂素玉米素、终浓度为0.1‑0.5 mg/L的生长素吲哚丁酸、终浓度为30 g/L蔗糖；成苗和生根培养基：在1/2 WPM培养基中，加入终浓度为10‑12.5 mg/L的生长素吲哚丁酸、终浓度为15 g/L的蔗糖、终浓度为0.3g/L的活性炭；上述培养基均在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至5.8。