[发明专利]一种芩黄清肺散的质量检测方法

摘要

本发明公开了一种芩黄清肺散的质量检测方法，所述方法包括：采用显微鉴定和薄层色谱法对芩黄清肺散样品中的黄芩、大黄、枇杷叶和甘草进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对芩黄清肺散样品中的主要成分黄芩的含量进行测定；通过上述方法对芩黄清肺散样品的组成成分分别进行检测，可有效控制芩黄清肺散样品的质量，使芩黄清肺散更安全、可靠、有效的应用于临床。

主权项

1.一种芩黄清肺散的质量检测方法，其特征在于，包括步骤：确定样品组成成分：取过120目筛的芩黄清肺散样品适量，用水合氯醛对所述芩黄清肺散样品进行透化，将透化后的样品置于倒置荧光显微镜下，根据观察到的显微特征确定芩黄清肺散样品中的组成成分，芩黄清肺散样品中各成分的显微特征明显，在显微镜下可准确分辨，黄芩的显微特征为韧皮纤维状，大黄的显微特征为草酸钙簇晶状，直径为60‑140μm，枇杷叶的显微特征为单细胞非腺毛状，甘草的显微特征为草酸钙方晶状；黄芩成分的薄层色谱鉴别：取芩黄清肺散样品2g，加甲醇50mL，超声处理30min后进行过滤，滤液浓缩至10mL，再次滤过，取滤液作为供试品溶液，分别取缺黄芩的芩黄清肺散2g和黄芩对照药材1g，同法制成阴性对照品溶液和对照药材溶液，再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液，分别吸取上述对照药材溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各4μL以及黄芩苷对照品溶液2μL，分别点在同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯‑丁酮‑甲酸‑水为展开剂，质量比计为5：3：1：1，置展开缸中预饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰；大黄成分的薄层色谱鉴别：取芩黄清肺散样品0.2g，加20mL甲醇，浸1h后滤过，取10mL蒸干，残渣加水10mL，再加1mL盐酸，水浴加热后加乙醚萃取2次，每次10mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液，分别取缺大黄的芩黄清肺散和大黄对照药材各0.2g，同法制成阴性对照品溶液和对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液，吸取上述4种溶液各4μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以正己烷‑乙酸乙酯‑甲酸为展开剂，比例为8：3：0.2，置展缸中预饱和30分钟，展开，晾干，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙色斑点，阴性对照品溶液无干扰；枇杷叶成分的薄层色谱鉴别：取芩黄清肺散样品2g，加甲醇20mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供试品溶液，分别取缺枇杷叶的芩黄清肺散和枇杷叶对照药材2g，同法制成阴性对照品溶液和对照药材溶液，再取熊果酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液，吸取上述4种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯‑丙酮为展开剂，比例为5：1，展开，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰；甘草成分进行薄层色谱鉴别：取芩黄清肺散样品10g，加70%乙醇50mL，超声处理30min，滤过，滤液加浓盐酸3mL，摇匀，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL分次溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20mL，合并乙醚提取液，再用水洗涤3‑5次，每次20mL，弃去水液，乙醚液加氨水10mL，萃取2次，收集氨水加浓盐酸10mL后用乙醚萃取2次，每次10mL，后水洗3‑4次，收集乙醚液，蒸干，加甲醇定容到2mL，作为供试品溶液，同法制备甘草阴性对照溶液，取甘草对照药材粉末1g，加70%乙醇20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液加浓盐酸2mL，摇匀，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液4mL；吸取上述对照药材溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯‑乙酸乙酯‑甲酸上层为展开剂，比例为4：1：0.5，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰；黄芩成分的定量测定：色谱条件：采用高效液相色谱法，色谱柱流动相采用质量比为47：53：0.2的甲醇‑水‑磷酸，流速为0.5‑1.5mL/min，检测波长为260‑300nm，柱温为30‑50℃；对照品溶液制备：黄芩苷对照品3mg，精密称定于50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，超声波处理约5分钟至黄芩苷溶解，制成每1mL含约60μg左右的母液，即得，‑20℃保存，使用前用0.45μm的微孔过滤膜过滤；供试品溶液制备：取芩黄清肺散样品粉末约0.3g，精密称定，加70%乙醇40mL，加热回流3小时，放冷，用滤纸过滤，滤液置100mL容量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤到EP管中，‑20℃保存；阴性对照品溶液的制备：取缺少黄芩的芩黄清肺散2g，加甲醇50mL，超声处理30min后过滤，滤液浓缩至10mL，再次过滤，取滤液作为阴性对照品溶液；分别取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，记录高效液相色谱图，在上述色谱条件下，理论塔板数黄芩苷大于2500，阴性对照在黄芩苷相同保留时间处无干扰峰；线性范围考察：吸取上述黄芩苷对照品溶液的母液2、4、6、8、10mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到黄芩苷的浓度分别为12，24，36，48，60μg/mL，吸取20μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品浓度作为横坐标X，峰面积作纵坐标Y，得出线性回归方程：y=60732x‑267829，r=0.9999，黄芩苷在0.604mg‑3.02mg具有很好的线性关系；精密度试验：精密吸取同一份黄芩苷对照品溶液20μL，在检测波长为280nm，流速1mL/min，柱温40℃的条件下重复进样6次，测定峰面积，得黄芩苷的RSD 为1.78%；稳定性试验：取同一批供试品溶液，依上述色谱条件分别在0、4、8、12、24h进样20μL，记录色谱图，测定峰面积，芩黄清肺散溶液在24h内测定值基本稳定，RSD为0.63%；重复性试验：取同一供试品平行称取6份，每份约0.6g，精密称取，依上述色谱条件测定，按外标法计算含量，求得黄芩苷含量的RSD值为0.99%；回收率试验：称取6份已知含量的芩黄清肺散样品约0.15g，精密称定，以样品含量的0.8，1.0，1.2倍，分别加入黄芩苷，制备溶液，进样时每个提取液进样测定2次，按上述色谱条件测定，按公式：回收率%=(C‑A)/B计算回收率，其中，C：加入对照品后的测得值，A：样品中所含被测成分量，B：加入对照品量。