[发明专利]色圈法快速筛检核诱变高效产氢菌株的方法

摘要

本发明涉及生物质能利用技术，旨在提供一种色圈法快速筛检核诱变高效产氢菌株的方法。包括取产氢菌接种在LB液体培养基中，培养至生长到对数生长期；以此制备单细胞菌悬液；用不同剂量的60Co‑γ射线辐射后，接种在固体平板培养基上；根据辐射前后的菌落数计算各辐射剂量下的致死率，选择致死率在85‑95％之间的菌悬液，稀释后涂布在筛选培养基平板上，培养至菌株周围出现明显的黄色色圈；挑选长势良好并周围具有相对更大黄色色圈的菌株，作为具备更高产氢能力的菌株。本发明利用产氢菌发酵生产氢气过程中必然伴随产酸的特点，通过筛选产酸量多的细胞以间接得到产氢能力显著提高的产氢菌突变株。此方法能够大大提高筛选工作效率，减少劳动时间及成本。

主权项

色圈法快速筛检核诱变高效产氢菌株的方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)取1ml产氢菌接种至100ml LB液体培养基中，在37℃、180rpm的摇床中振荡培养6h至产氢菌生长到对数生长期；离心除去液体培养基，用生理盐水制备菌悬液；玻璃珠振荡分散后，以无菌滤纸或脱脂棉过滤，形成单细胞菌悬液；(2)在多个试管内分别加入1ml单细胞菌悬液，并将各试管同时浸于冰水中；分别用不同剂量的60Co‑γ射线对各试管内的菌悬液进行辐射，辐射结束后继续冰浴1‑2小时；将辐射过的菌悬液分别接种在100ml新鲜的LB液体培养基中；用LB液体培养基稀释106倍后，取0.1ml菌悬液涂在固体平板培养基上；根据辐射前后的菌落数计算各辐射剂量下的致死率，致死率LR＝(U‑T)/U×100％；其中U为辐射前存活的总菌落数，T为辐射后存活的菌落数；(3)选择致死率在85‑95％之间的菌悬液，用LB液体培养基稀释106倍后，均匀涂布于筛选培养基平板上，在37℃条件下倒置培养12～24小时，至菌株周围出现明显的黄色色圈；挑选长势良好并且周围具有相对更大黄色色圈的菌株，作为具备更高产氢能力的菌株；所述LB液体培养基按下述配比关系配置而成：取0.5g酵母提取物、1g胰蛋白胨、0.5g NaCl，加入至100mL去离子水中，混匀；所述固体平板培养基按下述配比关系配置而成：取0.5g酵母提取物、1g胰蛋白胨、0.5g NaCl、2g琼脂粉，加入至100mL去离子水中，混匀；所述筛选培养基的pH值为7，其组分及配比关系为：每100ml筛选培养基中含有2g葡萄糖、0.5g酵母提取物、1g胰蛋白胨、0.5g NaCl、2g琼脂粉、0.04％溴甲酚紫，余量为去离子水。