[发明专利]一种大蒜根尖分生组织再生的方法及应用

摘要

本发明公开了一种大蒜根尖分生组织再生的方法及应用。主要采用宝坻大蒜根作为外植体诱导愈伤组织，诱导培养基为：MS+1 mg·L^‑12,4‑D+1 mg·L^‑16‑BA+30.0 g·L^‑1蔗糖+7.5 g·L^‑1琼脂，pH=5.8，愈伤组织诱导率达97.5%。愈伤组织经过继代两次后进行再分化，在分化7周后，不定芽长到5cm时进行试管鳞茎的诱导，试管鳞茎诱导培养基为：MS+120 g·L^‑1绵白糖+6.8 g·L^‑1琼脂，pH=7.5。该方法为大蒜愈伤组织途径进行脱毒快繁提供了新的技术方法，通过试管鳞茎途径再生提高了组培苗的成活率。

主权项

1.一种大蒜根尖分生组织再生的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）以大蒜根尖分生组织为外植体诱导愈伤组织：选取没有病斑的大蒜鳞茎剥去外皮后自来水冲洗30 min，然后于紫外灭菌后的超净工作台中用0.1%重量百分比的 HgCl2浸泡20 min，无菌蒸馏水洗涤2‑3次，75%重量百分比的的酒精浸泡10 min，无菌蒸馏水洗涤3‑5遍后，将大蒜鳞茎接入无菌培养瓶中生根；待根长至2‑3cm时，切下大蒜根部，用解剖针纵划，将其接入筛选培养基中进行愈伤组织诱导；诱导培养基为MS+1 mg·L‑1 2,4‑D+ 1 mg·L‑1 6‑BA+30.0 g· L‑1 蔗糖+7.5 g ·L‑1琼脂，pH=5.8；（2）大蒜根尖愈伤组织继代和再分化：大蒜根尖愈伤组织在诱导培养基上生长4周后，可进行继代，继代培养2周时，愈伤组织颗粒感明显，呈浅黄色，继代培养4周时，愈伤组织增殖 明显，继代两次后进行再分化，继代培养基与诱导培养基相同，再分化培养基为：MS+3 mg·L‑16‑BA+30g·L‑1蔗糖+7.5g·L‑1琼脂，pH=5.8；（3）试管鳞茎诱导与收获再分化培养1周时愈伤组织表面开始出现大量的绿点，2周可以观察到绿点不断生长，逐渐形成不定芽，3周时，大部分绿点形成不定芽，4周不定芽长至2cm，7周后不定芽生长长至5‑8 cm的簇生试管苗，将簇生试管苗移入诱导试管鳞茎培养基，其培养基为MS + 120 g · L‑1 绵白糖 + 6.8 g · L‑1琼脂， pH=7.5，试管鳞茎成熟后取出，清洗表层培养基后阴干，放4 ℃冰箱低温储存。