[发明专利]固定过氧化氢酶的明胶-二氧化硅杂化微球制备方法

摘要

本发明公开了一种固定过氧化氢酶的明胶‑二氧化硅杂化微球的方法。该方法以微孔膜渗透乳化过程为主加以实现的，其特征在于包括：制备含过氧化氢酶浓度为0.1‑2毫克/升的明胶/过氧化氢酶溶液；制备含有司班‑80质量浓度为0.25‑4.0%的液体石蜡油；将明胶/过氧化氢酶溶液与液体石蜡油混合制粗乳液；粗乳液以压力反复透过微孔膜，得到多级乳化的W/O型乳液；将多级乳化的W/O型乳液滴加入正硅酸乙酯水解液中，经过仿生矿化反应、固化、洗涤后得到用于固定化酶的明胶‑二氧化硅杂化微球。本发明的优点：制备条件温和，工艺简单易行，制得微球粒度均一，用于固定过氧化氢酶的能力强，耐受酸碱性好，储存稳定。

主权项

1.一种固定过氧化氢酶的明胶‑二氧化硅杂化微球的方法，其特征在于包括以下步骤：1）向200转/分钟磁力搅拌、55℃的2毫升水中加入0.2克明胶干粉，维持此速度下磁力搅拌0.5小时，至明胶干粉完全溶解于水中，溶解后明胶浓度为0.1克/毫升；向0.1克/毫升的明胶溶液中加入过氧化氢酶0.2毫克，溶解后过氧化氢酶浓度为0.1毫克/毫升；以上述过氧化氢酶/明胶水溶液作为水相；2）将油溶性乳化剂0.3g司班‑80加入到12毫升的液体石蜡中，以200转/分钟速度磁力搅拌30分钟，至司班‑80完全溶解，并将上述溶液加热至60℃作为油相；3）将3毫升正硅酸乙酯与0.7毫升去离子水混合，加入0.2毫升0.1摩尔/升的盐酸为催化剂，然后用超声波清洗器在室温下超声直至得到澄清透明的溶液，然后用去离子水将上述溶液稀释至50mM，并且用0.5摩尔/升的NaOH溶液将pH值调至7.0，从而得到正硅酸乙酯水解液；4）预乳化过程：按水相明胶/过氧化氢酶溶液与油相液体石蜡油的体积比为1:6，在温度550℃下，将水相明胶/过氧化氢酶溶液加入油相中，1600rpm速度下磁力搅拌得到粗乳液；5）膜乳化过程：采用管状Shirasu Porous Glass微孔膜，膜管直径为1厘米，长度为2厘米，膜孔径为3.5微米；使用前需要预先将微孔膜浸润于在预热至55℃的液体石蜡中30分钟，然后将微孔膜装入膜乳化装置中，快速将上述制备好的粗乳液加入膜乳化装置，通入氮气，在50kPa压力下使粗乳液通过微孔膜进入收集容器；将收集容器中过膜一次的乳液再次加入膜乳化器中，在50kPa压力下使粗乳液通过微孔膜进入收集容器；重复上述过程，直至过膜三次，得到多级乳化的W/O型乳液；6）仿生矿化过程：将多级乳化的W/O型乳液，逐滴加入到18mL、浓度为50mM的正硅酸乙酯水解液中，期间保持磁力搅拌速度为400转/分钟，全部滴加完后，迅速置于4℃冰水浴中，交联固化2小时，结束后，分别用异丙醇和丙酮进行洗涤至油相组分完全去除，然后在空气中自然干燥得到固定化酶的明胶微球。