[发明专利]完全利用脐带资源制备间充质干细胞的方法

摘要

一种完全利用脐带资源制备间充质干细胞的方法，步骤包括：清洗去大部分脐带的残留血液；将所有脐带制成组织碎块，并用胶原酶II消化；去除消化后的组织块，加入洗脱液进行离心，分离出未提纯原代脐带间充质干细胞；将获得的原代干细胞按5.0×104/cm2～1.0×105/cm2接种于塑料培养容器；待底层贴壁细胞融合80％以上后进行消化；消化分散后按需进行提纯。本发明的方法充分利用有限的脐带组织资源，减少造成不必要的浪费，增加了用于制备的组织体积，并且充分利用采集全部脐带资源，最大程度上地提取具有有效生物活性的脐带间充质干细胞，有利于高产地获得脐带内部蕴含间充质干细胞。

主权项

一种完全利用脐带资源制备间充质干细胞的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤一，清洗去大部分脐带的残留血液，并保留动、静脉内部10v/v％～20v/v％的残留未凝固血液；步骤二，将脐带制成组织碎块，并用胶原酶II消化；步骤三，加入DMEM培养基进行300r/min10分钟离心，完全提取残剩组织碎块和上层液交界的胶状液体，收集上层液；步骤四，上层液中再次加入洗脱液，重悬后1800r/min离心15分钟；步骤五，弃上层液后收集沉淀，加入洗脱液重悬，1000r/min离心10分钟，重复清洗两次，即获得脐带内部蕴含的间充质干细胞；步骤六，将所述获得的原代脐带间充质干细胞接种于含有10v/v％胎牛血清的LG‑DMEM培养基中培养，3天后第一次换完全培养基，弃去非贴壁细胞，以后每2天后更换完全培养基，按需求进行提纯、消化分散贴壁细胞。