[发明专利]一种芽孢杆菌及其在制备γ-聚谷氨酸中的应用

摘要

本发明属于微生物领域，涉及一种芽孢杆菌及其在制备γ‑聚谷氨酸中的应用，尤其涉及一种高产γ‑聚谷氨酸菌株—芽孢杆菌DLF‑15161(Bacillus sp.DLF‑15161)，以及该菌株在微生物发酵制备γ‑聚谷氨酸中的应用。本发明的γ‑聚谷氨酸产生菌合成的产物γ‑聚谷氨酸产量高，在适宜的发酵条件下发酵48h，产物γ‑聚谷氨酸的最高产量可达120g/L以上，具有很好的工业化应用前景。

主权项

1.一种制备γ‑聚谷氨酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)活化培养：将冷冻保存的芽孢杆菌株经梯度稀释后接种到活化平板培养基上，30～40℃下培养24～48小时，获得单菌落；所述芽孢杆菌，保藏编号CCTCC NO:M 2016674；所述芽孢杆菌的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示；所述活化培养基配方如下：甘油15g/L，酵母膏5g/L，谷氨酸钠20g/L，柠檬酸钠16g/L，NH₄Cl 7g/L，K₂HPO₄ 0.5g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂ 0.15g/L，MnSO₄ 0.104g/L，FeCl₃ 0.04g/L，琼脂15g/L，溶剂为水，pH7.0；(2)种子培养：将步骤(1)得到的单菌落，挑取一环接种于种子培养基中，30～40℃下恒温振荡培养至菌株的对数生长期，得到种子液；所述种子培养基配方如下：甘油15g/L，酵母膏5g/L，谷氨酸钠20g/L，柠檬酸钠16g/L，NH₄Cl 7g/L，K₂HPO₄ 0.5g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂ 0.15g/L，MnSO₄ 0.104g/L，FeCl₃ 0.04g/L，溶剂为水，pH 7.0；(3)发酵培养：将步骤(2)得到的种子液，按照体积1～5％的接种量接种到发酵培养基中，30～40℃培养24～72h，得到含有γ‑聚谷氨酸的发酵液；发酵培养基配方如下：柠檬酸三铵50g/L，胰蛋白胨40g/L，谷氨酸钠80g/L，NH₄Cl 7g/L，K₂HPO₄ 0.5g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂ 0.15g/L，MnSO₄ 0.1g/L，溶剂为水，pH 7.0；(4)γ‑聚谷氨酸的提取：发酵液经12000～14000rmp离心15～30min，取上清液，加入2～4倍体积的无水乙醇，低温8‑12h，离心收集沉淀，加少许去离子水冲洗后溶解，离心去除不溶物，再次醇沉得到的沉淀物透析除盐，最后经真空冷冻干燥得到白色粉末状产物，即γ‑聚谷氨酸。