[发明专利]一种用于诊断FAdV/MDV/ALV/REV4重PCR检测试剂盒

摘要

本发明属于公开了一种用于诊断FAdV/MDV/ALV/REV 4重PCR检测试剂盒，主要用于鉴别Ⅰ群禽腺病毒、马立克氏病病毒、鸡淋巴细胞白血病病毒与禽网状内皮组织增生症病毒4重聚合酶链式反应，包括裂解液、扩增反应混合液、阴性对照物和阳性对照物。本发明针对Ⅰ群禽腺病毒、马立克氏病病毒、鸡淋巴细胞白血病病毒与禽网状内皮组织增生症病毒基因组设计4对引物，建立了4重聚合酶链式反应诊断方法并组装成用于鉴别4重聚合酶链式反应诊断试剂盒，该试剂盒检测快速、灵敏，特异性好，能一次检测4种引起禽肝脾肿大的病毒性疾病，结果直观准确，省时省力，大大降低诊断费用，适用于大范围禽肿瘤性疾病的普查诊断。

主权项

1.一种用于诊断FAdV/MDV/ALV/REV4重PCR检测试剂盒，用于鉴别Ⅰ群禽腺病毒、马立克氏病病毒、鸡淋巴细胞白血病病毒与禽网状内皮组织增生症病毒4重聚合酶链式反应，其特征在于，包括裂解液、扩增反应混合液、阴性对照物和阳性对照物；其中，所述裂解液的成分为DNAiso Reagent；所述扩增反应混合液的原料成分包含灭菌三蒸水、10×PCR Buffer、2.5mmol·L^‑1dNTP、25μmol·L^‑1 FADV‑F上游引物、25μmol·L^‑1 FADV‑R下游引物、25μmol·L^‑1 MDV‑F上游引物、25μmol·L^‑1 MDV‑R下游引物、25μmol·L^‑1 ALV‑F上游引物、25μmol·L^‑1 ALV‑R下游引物、25μmol·L^‑1 REV‑F上游引物、25μmol·L^‑1 REV‑R下游引物、5U/μL rTaq DNA聚合酶；所述阴性对照物为灭菌三蒸水；所述阳性对照物为Ⅰ群禽腺病毒、马立克氏病病毒、鸡淋巴细胞白血病病毒与禽网状内皮组织增生症病毒的阳性质粒混合物；所述FADV‑F上游引物的序列为：5’‑ATGACTGCGCTTACTCCCGA‑3’；所述FADV‑R下游引物的序列为：5’‑ACCCAGATAGTTGGTACC‑3’；所述MDV‑F上游引物的序列为：5’‑CAGCTGCGTATTTTCCCCG‑3’；所述MDV‑R下游引物的序列为：5’‑AATTACTTGGTCTTTAACC‑3’；所述ALV‑F上游引物的序列为：5’‑TGTAGTGTTATGCAATACTC‑3’；所述ALV‑R下游引物的序列为：5’‑GGGTATGTTGGCTCCCTGCA‑3’；所述REV‑F上游引物的序列为：5’‑AATGTGGGAGGGAGCTCCGG‑3’；所述REV‑R下游引物的序列为：5’‑ACATTTTCCCTCATTGGA‑3’。