[发明专利]荭草花抗心肌缺血活性成分的筛选方法

摘要

本发明公开了一种荭草花抗心肌缺血活性成分的筛选方法，应用心肌细胞选择性地结合荭草花提取物中的活性成分，洗去未结合的其他成分后，使细胞靶点失活，被结合的活性成分从心肌细胞中释放出来，然后采用UHPLC‑Q‑TOF/MS技术进行分析鉴定。本发明的优点是：采用特定的H9c2心肌细胞，能够特异地、有选择性地与荭草花提取物中的活性成分结合，可以满足中药作用多靶点的活性成分的筛选，并且采用UHPLC‑Q‑TOF/MS系统建立了生物样品中可靠的定性分析方法，能够较全面地反映心肌细胞萃取溶液中的药物成分，为快速确定荭草花药效物质基础及创新药物研究提供参考。

主权项

1.一种荭草花抗心肌缺血活性成分的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：将含有荭草花提取物的缓冲液加入到处于对数生长期的H9c2心肌细胞中培养，去除溶液，清洗；向清洗后的所述H9c2心肌细胞加入pH值为4的磷酸盐缓冲液进行振摇，离心，收集上清液调节pH值为4，上样于Oasis HLB小柱，先用甲酸水清洗小柱，再用甲醇冲洗小柱，收集甲醇洗脱液，浓缩干燥，再加入甲醇溶解，离心分离，取上部的澄清液用于UHPLC‑Q‑TOF/MS检测分析；所述荭草花提取物的制备方法包括以下步骤：取荭草花加水煎煮，所得煎煮液浓缩至1.04～1.05，加入乙醇至溶液的含醇量达65％以上，混匀，静置，过滤，所得滤液浓缩至1.04～1.05，然后加入正丁醇萃取，将正丁醇萃取液浓缩，得萃取物；将所述萃取物用乙醇溶解，上样于聚酰胺层析柱，用80％的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，得荭草花提取物。