[发明专利]一种定量检测含糖醛酸多糖的方法

摘要

本发明提供了一种定量检测含糖醛酸多糖的方法，具体步骤：用三氟乙酸配制含糖醛酸多糖标准品溶液，含糖醛酸多糖为主链由己糖醛酸‑氨基己糖或己糖醛酸‑己糖重复二糖片段构成的多糖；将标准品进行酸水解、除酸，得到待测样品酸水解残余物；对标准样品酸水解残余物进行溶解，利用高效液相色谱仪串联三重四极杆质谱仪分析，得到多反应监测色谱图及标准曲线；采用与相同的方法处理并检测待测样品酸水解残余物；鉴定含糖醛酸多糖种类、得到待测样品中含糖醛酸多糖的含量。本发明操作步骤简捷，试剂价格低廉，耗时较短，且能够同时对多个由一个糖醛酸与一个氨基己糖或己糖的重复二糖片段组成的多糖进行准确定量。

主权项

1.一种定量检测含糖醛酸多糖的方法，其特征在于，具体步骤如下：S1、用1.3mol/L的三氟乙酸水溶液配制一系列浓度梯度的含糖醛酸多糖标准品溶液，其中所述含糖醛酸多糖标准品溶液中含糖醛酸多糖浓度在0.02～2.0mg/mL范围内；所述含糖醛酸多糖为主链由己糖醛酸‑氨基己糖或己糖醛酸‑己糖重复二糖片段构成的多糖；S2、准确量取1.00mL步骤S1制得的一系列浓度梯度的含糖醛酸多糖标准品溶液，分别密封，105℃下水解3h，放至室温，采用冷冻离心浓缩除去1.3mol/L的三氟乙酸水溶液，然后加入0.3～1mL甲醇，再采用冷冻离心浓缩除去甲醇及残留的三氟乙酸，以上操作重复三次，得到标准样品酸水解残余物；S3、对步骤S2所得标准样品酸水解残余物进行溶解，利用高效液相色谱仪串联三重四极杆质谱仪进行分析，即可得到所述多糖标准品降解产生的二糖片段的多反应监测色谱图，根据标准多糖溶液浓度与对应色谱峰面积的关系得到标准曲线；分析检测的条件为：高效液相色谱：Amide‑80亲水相互作用色谱柱，以含甲酸和乙酸铵的水溶液、乙腈为流动相等梯度洗脱，所述含甲酸和乙酸铵的水溶液中甲酸体积浓度为0.05％、乙酸铵摩尔浓度为10mmol/L，所述含甲酸和乙酸铵的水溶液与乙腈的体积比为30:70，柱温30℃，流速0.2mL/min；质谱条件：离子源ESI源，正离子模式，喷雾电压5.5kV，辅助加热气温度600℃，多反应监测，监测的离子对包括379.09/203.00、379.09/198.90、379.09/114.00、356.10/338.10、356.10/162.10、356.10/144.00；主链由己糖醛酸‑氨基己糖重复片段构成的多糖选择356.10/162.10作为定量离子对，主链由己糖醛酸‑氨基己糖重复片段构成的多糖选择379.09/203.00作为定量离子对；所述对步骤S2所得标准样品酸水解残余物进行溶解的具体过程为：用1mL与所述流动相组成相同的溶液将步骤S2制得的酸水解残余物溶解，将溶解液转移到10mL离心管中，转速10000×g、离心20min、采集上清液；S4、取待测样品，采用与步骤S1、S2相同的方法对所述待测样品进行酸水解、除酸，得到待测样品酸水解残余物；S5、采用与步骤S3相同的方法处理并检测待测样品酸水解残余物，得到酸水解残余物中多糖样品降解产生的二糖片段的多反应监测色谱图；S6、将步骤S5得到的待测样品多反应监测色谱图与步骤S3得到的标准样品多反应监测色谱图进行比较，根据高效液相色谱‑质谱获得的保留时间和特征离子鉴定含糖醛酸多糖种类；根据待测样品色谱峰面积结合标准曲线，即可得到待测样品中含糖醛酸多糖的含量。