[发明专利]一种利用无菌蓝莓组培苗采集菌根真菌的方法

摘要

本发明涉及一种利用无菌蓝莓组培苗采集菌根真菌的方法，属于植物菌根领域。该方法主要包括无菌蓝莓组培苗瓶外生根培养、移栽培养、菌根真菌分离纯化和保存、检验四个步骤。本发明所采用的方法是将没有菌根真菌侵染的蓝莓组培苗木直接栽种到具有蓝莓菌根真菌的环境中，促使根系自然接种菌根真菌，然后再从根系上获取菌根真菌。这种方法较常规的方法相比，省去了前期比较繁琐的采样、分离和接种过程，不仅明显地缩短了采集菌根真菌所需要的时间，并且极大地减少了工作量。因此，此方法更便利快捷。

主权项

1.一种利用无菌蓝莓组培苗采集菌根真菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1无菌蓝莓组培苗瓶外生根培养(1)选取组培复壮苗，进行7‑10天的炼苗处理，炼苗期间大棚温度控制在25‑30℃，4‑6天后打开组培瓶盖，再炼苗2‑3天；(2)炼苗结束后，选用生长旺盛、粗壮的复壮苗，将沾带的培养基清洗干净，剪成3‑4cm茎段浸润生根液后，扦插到扦插基质中，置于拱棚中进行生根培养3周，拱棚薄膜上部使用透光率50％的遮荫网覆盖，拱棚中空气湿度≥85％，拱棚内最高温度控制在30℃以下，最低温度不低于18℃；至扦插的茎段根萌发后揭去遮荫网，再进行培养2‑3周；所述的生根液为500mg/L吲哚乙酸水溶液；所述的扦插基质制备方法如下：将泥炭藓采用0.1wt％的高锰酸钾消毒，覆盖薄膜密闭24h后装入塑料穴盘作为扦插基质；S2移栽培养(1)将生根后的复壮苗移栽到无菌培养基质上，然后置于空气湿度控制在80％‑90％，温度控制在24‑28℃的温室内培养3个月，待复壮苗长到9‑11cm，取其根系镜检；(2)将镜检结果没有被菌根真菌侵染的复壮苗根系用无菌培养基质包裹后，移栽到目标区域浇足水，生长2‑3月；所述的目标区域为杜鹃花科植物的植株基部20‑50cm的范围内；S3菌根真菌分离纯化和保存采用台盼蓝染色法对目标区域的蓝莓根段进行镜检、并分离纯化、保存菌根真菌；S4检验将步骤S3分离纯化的真菌再次回接到无菌蓝莓苗中进行验证，验证是否为目标真菌。