[发明专利]基于UPLC/LTQ‑OrbitrapVelosMS检测石斛生物碱成分的方法

摘要

本发明提供了基于UPLC/LTQ‑Orbitrap Velos MS检测石斛生物碱成分的方法，通过超声处理，并用纯甲醇溶液进行提取，针对生物碱成分的化学性质，采用酸水溶解甲醇提取物，并进一步碱化，使生物碱盐转变为游离的生物碱，利用二氯甲烷溶液进行萃取，用超高效液相色谱分离所述游离生物碱待测样品，将分离后的生物碱成分用质谱检测；采用OSI/SMMS软件完成未知代谢物定性。本发明首次采用UPLC/LTQ‑Orbitrap Velos MS技术对石斛中生物碱成分进行定性检测，共鉴定出22种生物碱成分，且均首次在石斛中被分离检测出，明确了石斛生物碱成分的类型，为研究其药理作用奠定了理论基础。

主权项

基于UPLC/LTQ‑Orbitrap Velos MS检测石斛生物碱成分的方法，包括以下步骤：1)将石斛待测样品杀青后烘烤；所述石斛为铁皮石斛；2)将所述步骤1)烘烤后的石斛与有机溶剂混合后磨碎，得到石斛浆液；所述的有机溶剂包括甲醇、乙醚或丙酮；3)将所述步骤2)得到的石斛浆液进行超声破碎，固液分离后，得到上清液；4)将所述步骤3)得到的上清液进行浓缩，得到提取物干粉；5)将所述步骤4)得到的提取物干粉与硫酸溶液混合，得到混合液，调节所述混合液的pH值至9.5～10.5，将得到的碱性混合液静置；6)将所述步骤5)静置后的碱性混合液与二氯甲烷混合，离心，得到二氯甲烷相；7)将所述步骤6)得到的二氯甲烷相浓缩，得到生物碱干粉；8)将所述生物碱干粉用甲醇复溶，固液分离后得到游离生物碱待测样品；9)用超高效液相色谱分离所述游离生物碱待测样品，将分离后的生物碱成分用质谱检测，得到生物碱成分物质峰；10)用OSI/SMMS软件对所述生物碱成分物质峰进行定性分析；所述步骤9)中色谱分离条件包括如下参数：色谱柱为Hypersil GOLD液相色谱柱；所述Hypersil GOLD液相色谱柱的规格为2.1mm×100mm×1.9μm；柱温为40℃；洗脱系统流动相A为体积比0.1％甲酸水溶液，流动相B为体积比0.1％甲酸乙腈溶液；洗脱的流速为0.35mL/min；进样体积为5μL；流动相梯度洗脱程序：(0,1min)，流动相A与流动相B的体积比19：1的混合液；[1min,24min)，流动相A与流动相B的体积比为恒定值，所述恒定值的范围为1：19～19：1；[24min,28min)，流动相A与流动相B的体积比为1：19；[28min,28.1min)，流动相A与流动相B的体积比为恒定值，所述恒定值的范围为1：19～19：1；[28.1,30min]，流动相A与流动相B的体积比为19：1；所述石斛生物碱成分为裘波树碱、颠茄次碱、猕猴桃碱、常绿钩吻碱、阔叶狗舌草碱、酸浆双古豆碱、黄小檗碱、别隐品碱、荷花碱、结乌头根碱、垂石松碱、红豆裂碱、番木瓜碱、富贵草碱、飞廉碱和双青藤碱，还包括具有式Ⅰ的化合物1，具有式Ⅱ的化合物2、具有式Ⅲ的化合物3、具有式Ⅳ的化合物4、具有式Ⅴ的化合物5和具有式Ⅵ的化合物6；