[发明专利]一种DNA分子的定点编辑方法

摘要

本发明一种DNA分子的定点编辑方法，采用静电场电荷相互作用，载玻片作为调控装置的中间介质，铜胶带作为装置电极板，并在上下两表面分别引出一条导线用于与直流电源相连；DNA分子溶液用TE缓冲液稀释至一定浓度作为实验DNA溶液，采用新鲜剥离的氟晶云母片作为基底，将氟晶云母片置于电场调控装置上极板的中间位置，将配置好的DNA溶液滴到云母片上，然后采用电压增进式对装置进行充电，将每个电压值下拉伸的DNA分子样品置于AFM系统下成像，直至在云母片上得到具有拉直的并且分散有序的DNA分子图像，随后选择单根DNA分子并分别采用恒力切割和酶切割两种方法对DNA分子进行定点切割。本发明具有良好的稳定性；采用恒力和酶切割，方法简便快捷，碱基针对性强，效率高。

主权项

1.一种DNA分子的定点编辑方法，其特征在于：采用电场调控装置操纵DNA分子使其由凌乱无序状态拉伸为平行有序序列，然后通过AFM系统完成DNA分子的定点切割，具体步骤如下：第一步，DNA分子溶液的配置：取1.0～2.0μL的原浓度为0.25～0.6μg/μL的DNA分子溶液，48.0～49.0μL的TE缓冲液，将两溶液混合，置于离心管中采用振荡器振荡，得到稀释均匀的DNA分子溶液，密封待用；第二步，云母衬底预处理：将云母衬底分别用去离子水、无水乙醇超声清洗60～120s，取出后自然干燥；用透明胶带剥离云母衬底，得到完整的一层，密封待用；第三步，电场调控装置的制作：将表面积为0.5cm×1.5cm～1.0cm×3.0cm、厚度为0.1mm～0.3mm的载玻片作为调控装置的电介质，分别置于去离子水、无水乙醇中超声清洗3～5次，每次60～120s，取出后干燥；将表面积为0.5cm×1.5cm～1.0cm×3.0cm、厚度为0.01～0.05mm的导电金属片平铺覆盖于载玻片的上、下两个表面作为电场调控装置的上、下两极板，分别置于去离子水、无水乙醇中超声清洗3～5次，每次60～120s，取出后干燥，制成电场调控装置；第四步，拉直：将第三步中的电场调控装置通过导线与直流电源相连，将第二步中剥离后的云母衬底置于装置的中间位置，调节电源电压，待装置充电完成，将第一步中稀释均匀的DNA分子溶液滴到不同电压值下的云母衬底表面；第五步，成像：将DNA分子样品置于AFM系统样品台上，AFM系统设置为成像Imaging工作模式，扫描成像，得到DNA分子扫描图像；第六步，定点切割：在第五步中的DNA分子扫描图像中选择一根单独被拉伸的DNA分子作为切割目标，然后采用恒力定点切割或酶定点切割方法对目标DNA分子进行定点切割，最终完成DNA分的定点编辑。