[发明专利]大叶金花草指纹图谱的构建方法及其指纹图谱

摘要

本发明公开了一种大叶金花草指纹图谱的构建方法及其指纹图谱，具体是：材料准备；制备原儿茶醛参照溶液；制备原儿茶酸参照溶液；制备牡荆素参照溶液；制备荭草苷参照溶液；用乙醇超声提取法制备供试品溶液；采用HPLC测定得到指纹图谱。以及由此方法得到的大叶金花草标准指纹图谱，通过对大叶金花草高效液相色谱指纹图谱的研究，得到了一种较好的大叶金花草质量控制方法。本发明方法简便、快速、准确、重现性好,为大叶金花草质量的全面有效控制提供了有力保障。

主权项

1.大叶金花草指纹图谱的构建方法，其特征在于，采用液相色谱法对大叶金花草进行测定，具体方法如下：（1）材料准备：供试品的大叶金花草全采自广西，经广西中医药大学药用植物园鉴定为陵齿蕨科植物乌蕨Stenoloma chusanaum Ching的全草；原儿茶酸、原儿茶醛、荭草苷和牡荆素四种对照品由中国食品药品检定研究院提供；将供试品磨成粉末，过2号筛备用；（2）参照物溶液的制备：原儿茶醛，精密称定，用50%乙醇溶解，制成浓度为0.0498mg/ml的参照溶液；原儿茶酸，五氧化二磷减压干燥24h，精密称定，用50%乙醇溶解，制成浓度为0.0538mg/ml的参照溶液；牡荆素，五氧化二磷减压干燥24h，精密称定，用50%乙醇溶解，制成浓度为0.0573mg/ml的参照溶液；荭草苷，五氧化二磷减压干燥24h，精密称定，用50%乙醇溶解，制成浓度为0.0503mg/ml的参照溶液；（3）供试品溶液的制备：称取供试品粉末0.3g，置于50ml锥形瓶中，加入50%乙醇30ml超声30min，滤过，浓缩至约15ml，用60ml乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，挥干乙酸乙酯，得残留物，残留物用10%乙腈定容至5ml容量瓶中，用移液管从容量瓶中移取1ml～5ml容量瓶，再用10%乙腈稀释至刻度线即得供试品溶液；（4）色谱条件及系统适用性试验：色谱柱：Agilent TC‑C18；流动相：B泵：乙腈；D泵：0.4%磷酸；梯度洗脱程序：0～10min，B泵：10%→15%，D泵:90%→85%；10～40min，B泵：15%→20%，D泵:85%→80%；40～45min，B泵：20%→25%，D泵:80%→75%；45～55min，B泵：25%→30%，D泵:75%→70%；55～70min，B泵：30%→30%，D泵:70%→70%；检测波长：210nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；理论塔板数按原儿茶酸计算不低于10000；（5）测定：将供试品溶液放于离心机中13000r/min离心10分钟，精密吸取上清液10µL，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。