[发明专利]一种用于增强记忆力的血浆分离物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种用于增强记忆力的血浆分离物及其制备方法和应用。该血浆分离物来源于血浆，包括多种蛋白质和多种小分子，所述血浆分离物的FPLC鉴定具有4个峰，对应的蛋白大小分别是：30kD、50kD、100kD、120kD。该制备方法依次包括以下步骤：血浆收集、低温超滤、冷硫铵沉淀、SD灭活、阴离子交换、透析、浓缩。该血浆分离物可以用于预防、改善和治疗老年痴呆症，此外其还可以起到增强记忆力的作用。

主权项

1.一种用于增强记忆力的血浆分离物，其特征在于：来源于血浆，包括多种蛋白质和多种小分子，所述血浆分离物的FPLC鉴定具有4个峰，对应的蛋白大小分别是：30 kD、50 kD、100 kD、120 kD；所述血浆分离物的制备方法依次包括以下步骤：血浆收集、低温过滤、低温超滤、冷硫铵沉淀、SD灭活、阴离子交换、透析、浓缩；在所述低温过滤步骤中，在压力条件下将所述血浆进行过滤，得到滤液，所述过滤采用的滤膜的孔径为0.22微米或0.45微米；在所述低温超滤步骤中，将所述滤液通过施加压力进行膜包超滤，得到低温超滤产物；所述膜包截留分子量为3kD‑10kD；所述超滤的温度为0‑4℃，压力为1‑20MPa；所述超滤使用的缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris‑盐酸缓冲液、HBS缓冲液中的一种；所述Tris‑盐酸缓冲液的浓度为1‑100 mM、pH值为8.0，所述磷酸缓冲液的浓度为20 mM、pH值为8.0，所述HBS缓冲液的浓度为250mM、pH值为7.0；在所述冷硫铵沉淀步骤中，将所述低温超滤产物与预冷的饱和硫铵溶液混合后静置，得到冷硫铵沉淀产物；所述预冷的温度为0‑4℃；所述饱和硫铵溶液和所述低温超滤产物的体积比为1：（1‑6）；所述静置温度为0至 10℃；在所述SD灭活步骤中，将所述冷硫铵沉淀产物用SD灭活剂重新悬浮后静置，静置后进行离心处理，保留上清液，作为SD灭活产物；所述静置温度为4~37℃，时间为6~24小时；所述SD灭活剂含有0.3~2% 的N‑丁基三磷酸盐、0.5~2%的吐温；所述离心处理中，离心力为2000‑8000g，时间为10‑30分钟，温度为0‑4℃；在所述阴离子交换步骤中，将所述SD灭活产物加入阴离子交换柱中采用洗脱缓冲液进行梯度洗脱，收集洗脱液得到阴离子交换产物，其中，所述洗脱缓冲液为含有300‑500mM氯化钠的Tris‑盐酸缓冲液，所述Tris‑盐酸缓冲液的浓度为0.2‑200mM、pH值为8.0‑9.2，开始收集洗脱液时的洗脱体积为35ml，停止收集洗脱液时的洗脱体积为45ml；在所述透析步骤中，将所述阴离子交换产物进行透析，收集透析容器中的产物得到透析产物；所述透析采用的缓冲液为Tris‑盐酸缓冲液或者HBS缓冲液，所述Tris‑盐酸缓冲液的浓度为1‑75 mM、pH值为8.0，所述HBS缓冲液的浓度为175mM、pH值为7.5，所述透析的时间为20‑72h；所述透析的体积比是1：（100‑10000）；在所述浓缩步骤中，将所述透析产物进行浓缩，得到浓缩产物，即为所述血浆分离物；所述浓缩是采用浓缩管离心或者采用浓缩杯加压，所述浓缩管或者所述浓缩杯允许1.0‑3.0KD的物质通过。