[发明专利]一种异紫花前胡内脂单体的分离纯化方法

摘要

本发明涉及一种异紫花前胡内酯单体的分离纯化方法，属于中药化合物提取技术领域。本发明以伞形科植物羌活的根茎为原料，通过乙醇溶液提取、乙酸乙酯萃取、大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、高效制备液相色谱分离及酸水解步骤，得到异紫花前胡内酯单体。本发明通过适宜的工艺及参数条件，使产品中异紫花前胡内酯的含量达到99%以上；整个工艺过程稳定、操作简便、分离效率高，成本低廉，可大量高纯度分离制备异紫花前胡内酯单体。

主权项

1.一种异紫花前胡内酯单体的分离纯化方法，其特征在于，以羌活根茎为原料，通过提取、萃取、大孔树脂富集解析、硅胶柱层析及制备型高效液相色谱法步骤，分离得到高纯度的异紫花前胡苷，异紫花前胡苷酸水解得到异紫花前胡内酯单体；包括以下步骤：A.提取将羌活根茎粉碎成1～4mm的粗粉，然后按照每千克原料加入95％乙醇溶液6‑10升，提取3～4次， 2～3小时/次，回收乙醇，合并提取液，为提取液Ⅰ；B.萃取将步骤A所得的提取液Ⅰ，加入等体积的乙酸乙酯，萃取3～4次，收集萃取下层水溶液，得提取液Ⅱ；然后回收萃取乙酸乙酯层，回收后的乙酸乙酯再利用；C.大孔树脂富集解析将步骤B所得的提取液Ⅱ，用已活化的大孔树脂柱富集，富集完成后，用去离子水洗、80%乙醇解析，所得解析液回收乙醇，得提取液Ⅲ；D. 硅胶柱层析 将步骤C所得的提取液Ⅲ用纯甲醇溶液溶解，溶解液用60‑80目硅胶拌样，然后干燥；将干燥后的拌样原料利用硅胶层析柱分离，采用氯仿‑甲醇溶液为流动相，两者体积比为8比2，进行洗脱并收集产品；收集产品段回收有机试剂后，所得浓缩液用甲醇重结晶，结晶固体干燥后，待下一步处理；在洗脱过程中，进行TLC检测，确保收集产品是否完全；TLC点板条件为：硅胶G薄层板，以氯仿‑甲醇为展开剂，两者体积比为8比2，在365nm的紫外灯下检视显蓝色荧光斑点；E.制备型高效液相色谱分离将步骤D所得的结晶固体，用流动相溶解，过滤，滤液采用填料为C18制备型高效液相色谱分离，收集目标产品段；收集产品同时通过填料同样为C18分析HPLC紫外检测，确认收集目标化合物制备溶液的检测波长为330nm；所述制备型高效液相色谱采用填料为C18的色谱柱，制备流动相组成为四氢呋喃‑水，两者体积比为20比80；F.异紫花前胡苷产品回收将步骤E所得的异紫花前胡苷制备液，回收流动相，再用C18填料富集，90%甲醇溶液解析，所得解析液回收甲醇后，浓缩液有大量白色固体析出，过滤，干燥，即得高纯度的异紫花前胡苷固体；G.酸水解将步骤F所得的异紫花前胡苷固体，用甲醇溶液溶解后，再加入10%盐酸溶液，加热回流2‑3h，水解完成后，加入NaOH溶液调pH值至中性,再在50℃下减压浓缩至无醇，后用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩至干，即得异紫花前胡内酯单体。