[发明专利]一种检测苯醚甲环唑残留的ELISA检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开一种检测苯醚甲环唑残留的ELISA检测试剂盒及检测方法，利用氯乙烷将苯醚甲环唑分子结构中苯环上3位氢原子取代为乙基，并将其氧化为羧基，随后，利用混合酸酐法将半抗原连接至载体上形成人工抗体，载体为牛血清蛋白，利用苯醚甲环唑人工抗原免疫新西兰大白兔制备抗体，并与苯醚甲环唑标准品、浓缩洗涤液、底物显色液、反应终止液等相关试剂组成ELISA检测试剂盒。检测主要步骤包括：样品前处理、试剂盒检测、检测结果分析。与目前的几种应用较为广泛的常规检测方法相比，本发明涉及的酶联免疫检测方法具有成本低、检测灵敏度高等优点，为苯醚甲环唑的残留检测提供了有效的方法。

主权项

一种苯醚甲环唑多克隆抗体的制备方法，其特征是：（1）苯醚甲环唑半抗原制备：无水氯化铝与20 % 硝基苯放置于反应容器内，并将反应温度控制在10 ℃，加入氯乙烷，之后滴加苯醚甲环唑悬浮剂，滴完后匀速搅拌，并于10 ℃放置至反应完全；将反应物置于液体氟化氢溶液中，使其完全反应，室温放置2h，使氟化氢蒸发完全，反应结束后纯化产物；取高锰酸钾溶于反应液中，升温，取上述纯化产物加入反应容器内，升温并搅拌直至紫色消失；对苯醚甲环唑半抗原产物进行重结晶，得到纯净物质，即苯醚甲环唑半抗原；（2）苯醚甲环唑人工抗原制备：将苯醚甲环唑半抗原，溶于DMF中，均匀搅拌，加入三正丁胺，冰浴，加氯甲酸异丁酯，搅拌；取BSA，溶于0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液中；将半抗原、DMF混合溶液逐滴加入BSA溶液中，4 ℃下搅拌离心后，弃掉沉淀，上清液透析72 h，期间更换透析液，干燥后得到苯醚甲环唑人工抗原；（3）将苯醚甲环唑人工抗原对小型哺乳动物进行免疫，所得到的多克隆抗体即为苯醚甲环唑多克隆抗体。