[发明专利]减少引物二聚体扩增的方法有效
| 申请号： | 201680001111.1 | 申请日： | 2016-06-16 |
| 公开（公告）号： | CN106795569B | 公开（公告）日： | 2017-12-05 |
| 发明（设计）人： | 王朝晖;宋钢 | 申请（专利权）人： | 上海真固生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12P19/34;C07H21/04 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司11283 | 代理人： | 严政,刘依云 |
| 地址： | 200233 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明减少多重聚合酶链式反应(PCR)中引物二聚体扩增的方法。当第一正向引物(F1)和第二反向引物(R2)在其3’端具有互补区域时，可形成引物二聚体。本发明的方法使用包含在第一标签(t1)和R2之间的第一正向引物的5’端部分序列或全长序列的引物(F1^)以减少引物二聚体(F1_R2)扩增。 | ||
| 搜索关键词： | 减少 引物 二聚体 扩增 方法 | ||
【主权项】：
一种减少多重聚合酶链式反应(PCR)中引物二聚体扩增的方法，包括以下步骤：(a)获得第一核酸序列，所述第一核酸序列包含第一标签(t1)和与第一靶核酸片段互补的第一正向引物(F1)，(b)获得第二核酸序列，所述第二核酸序列包含第二标签(t2)和与所述第一靶核酸片段互补的第一反向引物(R1)，(c)获得第三核酸序列，所述第三核酸序列包含第三标签(t3)和与第二靶核酸片段互补的第二正向引物(F2)，(d)获得第四核酸序列，所述第四核酸序列包含所述第一标签(t1)、与所述第二靶核酸片段互补的第二反向引物(R2)以及所述第一标签(t1)与所述第二反向引物(R2)之间的所述第一正向引物(F1)的5’端部分序列(F1∧)或全长序列，其中所述第一正向引物(F1)和所述第二反向引物(R2)在其3’端具有互补区域，F1∧具有5’端部分F1序列的40‑90％或3‑30个核苷酸，(e)混合所述第一和第二靶核酸片段、所述第一、第二、第三和第四核酸序列以及有效量的进行聚合酶链式反应(PCR)必需的试剂；以及(f)进行PCR。
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