[发明专利]改进的甲基化DNA检测

摘要

本发明基于通过以下的敏感且特异性的甲基化检测的发现：a)在通过将DNA转化试剂(例如，亚硫酸氢盐试剂)直接与含有核酸的样品一起温育而控制转化前的过量DNA降解，而不需要从所述样品预先纯化核酸且不需要在98℃的升高的温度下预先使核酸变性，和b)通过控制亚硫酸氢盐处理的样品在自动化系统内的提取膜上的泵送流动速率而优化亚硫酸氢盐去除。

主权项

一种用于在包括包含提取膜的提取室的自动化系统中检测核酸甲基化状态的方法，所述方法包括以下步骤：‑将所述核酸的源引入所述自动化系统中，将亚硫酸氢盐加入所述核酸并随后立即加热所述核酸的源以产生包含所述核酸的裂解物，并使存在于所述核酸中的未甲基化的胞嘧啶碱基脱氨基；‑向所述裂解物中加入结合缓冲液以产生结合缓冲液和裂解物溶液；‑通过将所述结合缓冲液和裂解物溶液在所述提取膜上传输而将所述核酸结合至所述提取膜并除去所述亚硫酸氢盐；‑向所述提取室中加入脱磺化缓冲液，并将所述脱磺化缓冲液在所述提取膜上传输，以使所述核酸中在之前的步骤中脱氨基的碱基脱磺化，并将所述碱基转化成尿嘧啶碱基，‑从所述提取膜上洗脱转化的核酸；以及分析所述转化的核酸。