[发明专利]工程改造的CRISPR-CAS9组合物和使用方法

摘要

本说明书公开了工程改造的II型CRISPR‑Cas9‑缔合的分裂‑连结多核苷酸(sn‑casPN)系统，包括包含三个分裂‑连结多核苷酸(sn1‑casPN/sn2‑casPN/sn3‑casPN)的系统和包含两个分裂‑连结多核苷酸(sn1‑casPN/sn2‑casPN)的系统。与Cas9蛋白一起，sn‑casPN在体外和体内促进靶多核苷酸的位点特异性修饰，包括切割和诱变。此外，包含sn‑casPN的工程改造的II型CRISPR‑Cas9‑缔合的分裂‑连结多核苷酸系统可用于调节靶核酸的表达的方法。本文描述了用于产生包含两个或更多个sn‑casPN的各种工程改造的II型CRISPR‑Cas9‑缔合的分裂‑连结多核苷酸系统的方法。还描述了用于实施各种方法的多核苷酸序列、表达盒、载体、组合物和试剂盒。此外，本说明书提供了遗传修饰的细胞、修饰的细胞的组合物、转基因生物、药物组合物以及涉及工程改造的II型CRISPR‑Cas9‑缔合的分裂‑连结多核苷酸系统的各种组合物和方法。

主权项

II型CRISPR‑Cas9‑缔合的分裂‑连结多核苷酸组合物，其包含：包含5'端和3'端的第一II型CRISPR‑Cas9‑缔合的分裂‑连结多核苷酸(sn1‑casPN)，其在5'至3'方向包含第一茎元件核苷酸序列I和连结茎元件核苷酸序列I；包含5'端和3'端的第二II型CRISPR‑Cas9‑缔合的分裂‑连结多核苷酸(sn2‑casPN)，其在5'至3'方向包含连结茎元件核苷酸序列II，其中sn1‑casPN的连结茎元件核苷酸序列I和sn2‑casPN的连结茎元件核苷酸序列II能够通过在连结茎元件核苷酸序列I和连结茎元件核苷酸序列II之间的碱基对氢键合形成连结茎元件；和包含5'端和3'端的第三II型CRISPR‑Cas9‑缔合的分裂‑连结多核苷酸(sn3‑casPN)，其在5'至3'方向包含核酸靶标结合序列和第一茎元件核苷酸序列II，其中sn1‑casPN的第一茎元件核苷酸序列I和sn3‑casPN的第一茎元件核苷酸序列II能够通过在第一茎元件核苷酸序列I和第一茎元件核苷酸序列II之间的碱基对氢键合形成第一茎元件。