[发明专利]抗原特异性单克隆抗体制作方法

摘要

本发明涉及具有靶抗原特异性单克隆抗体产生能力的细胞的分离方法，将包含抗体产生细胞的细胞群利用交联剂进行固定化处理(交联剂是具有细胞膜透过性的可逆交联剂)，将固定化处理后的细胞群利用表面活性剂进行细胞膜溶解处理，使该细胞群与标记靶抗原反应，在染色后的细胞群中分离出与标记靶抗原发生了反应的至少1个细胞。本发明还涉及靶抗原特异性单克隆抗体的制作方法，从利用该方法分离出的细胞中分离mRNA，制备cDNA，由制备出的cDNA制备抗原特异性单克隆抗体或其片段。本发明提供能够高精度地分离出具有靶抗原特异性单克隆抗体产生能力的至少1个细胞的方法以及能够使用由该方法分离出的细胞制作靶抗原特异性单克隆抗体的方法。本发明提供新型苏氨酸18磷酸化p53(pT18‑p53)特异性单克隆抗体和苏氨酸68磷酸化CHK2(pT68‑CHK2)特异性单克隆抗体。

主权项

一种具有靶抗原特异性单克隆抗体产生能力的细胞的分离方法，其包括下述步骤：(1)固定化步骤，其是将包含抗体产生细胞的细胞群利用交联剂进行固定化处理的步骤，其中，所述交联剂是具有细胞膜透过性的可逆交联剂；(2)细胞膜溶解步骤，其是将固定化处理后的细胞群利用表面活性剂进行处理的步骤；(3)染色步骤，其是使进行了细胞膜溶解处理的细胞群与标记的靶抗原进行反应的步骤，以下将该标记的靶抗原称为标记靶抗原，其中，细胞膜溶解步骤(2)和染色步骤(3)可以依次实施、也可以并行地实施；(4)细胞分离步骤，其是在经历了染色步骤的细胞群中分离出与标记靶抗原发生了反应的至少1个细胞的步骤。