[发明专利]用于测量配体与靶标蛋白质的结合和细胞接合的方法在审
| 申请号： | 201680054321.7 | 申请日： | 2016-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN108368535A | 公开（公告）日： | 2018-08-03 |
| 发明（设计）人： | D.K.特赖伯;E.梅尼凯利 | 申请（专利权）人： | 欧陆迪斯卡沃爱克斯公司 |
| 主分类号： | C12Q1/34 | 分类号： | C12Q1/34;C12Q1/48;G01N33/58;G01N33/68;C07K19/00;C12N9/10;C12N9/12;C12N9/14;C12N9/40 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律师事务所 11105 | 代理人： | 张晓飞;余晓文 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 公开了用于检测和定量测量化合物与靶标大分子的结合性质的方法，其中所述靶标大分子经受变性并且与诸如酶短片段的标记肽连接。所述方法使用流体混合物，所述流体混合物包含(i)嵌合分子，其包含与所述标记肽连接的靶标大分子的，其中所述靶标大分子可以是由完整活细胞表达并且在完整活细胞内的嵌合蛋白，和(ii)其与所述靶标大分子结合经测量的化合物，其中所述靶标大分子经受变性。在允许化合物(例如所述靶标大分子的小分子抑制剂)结合之后，例如通过酶片段互补检测来自所述标记肽的信号。该信号指示变性和未变性靶标大分子之间的差异，并且由此分别指示未与所述化合物结合的靶标大分子和与所述化合物结合的靶标大分子之间的差异。 | ||
| 搜索关键词： | 靶标大分子 变性 标记肽 化合物结合 流体混合物 活细胞 小分子抑制剂 靶标蛋白质 测量配体 定量测量 方法使用 结合性质 嵌合蛋白 嵌合分子 细胞接合 信号指示 酶片段 检测 短片 测量 | ||
【主权项】：
1.一种用于测量化合物与靶标大分子之间的结合的方法，其包括：(a)制备流体混合物，所述流体混合物包含(i)表达嵌合蛋白的完整活细胞，所述嵌合蛋白包含与标记肽连接的靶标大分子，和(ii)其与所述靶标大分子结合经测量的化合物，其中所述靶标大分子经受变性；(b)在允许所述化合物与所述靶标大分子结合的条件下孵育步骤(a)的所述流体混合物；(c)在步骤(b)中孵育后，在产生(i)未与所述化合物结合的变性嵌合分子和(ii)与所述化合物结合的非变性嵌合分子的组合混合物的条件下，使所述流体混合物中的靶标大分子变性；(d)使步骤(c)的所述组合混合物与结合至所述标记肽的第二标记接触以形成复合物，其中所述复合物在(i)未与所述化合物结合的变性嵌合分子的情况下比在(ii)与所述化合物结合的非变性嵌合分子的情况下形成更少；和(e)检测步骤(d)中的所述复合物以产生指示化合物与靶标大分子之间结合的测量值的信号。
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