[发明专利]用于提供3，4-二羟基苯基化合物及其甲基化变体的生物技术方法

摘要

本发明涉及通过如下获得的经遗传修饰的酶和使用所述酶或其催化活性片段的包括体内和体外方法的生物技术方法：合理设计用于羟基化4‑羟基苯基化合物以产生3，4‑二羟基苯基化合物的原型酶4‑羟基苯乙酸3‑羟化酶(4HPA3H)的活性位点结合口袋。还提供了使用合适的氧化酶或羟化酶的方法，所述方法进一步通过提供合适的O‑甲基转移酶使3，4‑二羟基苯基化合物能够在偶联酶促反应中进行随后的位点特异性甲基化。最后，公开了能够通过上述方法获得的组合物。

主权项

1.催化至少一种4‑羟基苯基化合物的生物技术转化以用于产生至少一种3，4‑二羟基苯酚化合物的方法，其包括以下步骤：(i)提供至少一种氨基酸序列，所述氨基酸序列包含以下或由以下组成：在其活性位点中包含至少一个突变的经遗传修饰的大肠杆菌来源的4‑羟基苯乙酸3‑羟化酶或其催化活性片段；(ii)提供至少一种4‑羟基苯基化合物；(iii)使所述至少一种4‑羟基苯基化合物与所述至少一种包含所述4‑羟基苯乙酸3‑羟化酶或其催化活性片段或由所述4‑羟基苯乙酸3‑羟化酶或其催化活性片段组成的氨基酸序列在合适的反应条件下反应，以允许所述至少一种4‑羟基苯基化合物通过所述至少一种包含所述4‑羟基苯乙酸3‑羟化酶或其催化活性片段或由所述4‑羟基苯乙酸3‑羟化酶或其催化活性片段组成的氨基酸序列羟基化以产生至少一种3，4‑二羟基苯酚化合物；以及(iv)任选地分离和/或纯化所得的至少一种3，4‑二羟基苯酚化合物。