[发明专利]用于形成连接产物的方法和组合物

摘要

在一些方面，本公开内容提供了用于形成包含单链多核苷酸的连接产物的方法。由本公开内容的各个方面形成的连接产物可用于各种应用，包括但不限于序列分析。在一些实施方案中，所述连接产物包含无细胞多核苷酸。在一些方面，本公开内容提供了与本文方法一致的反应混合物、试剂盒和复合体。

主权项

1.一种用于鉴定包含多个无细胞DNA多核苷酸的核酸样品中的序列变体的方法，其包括：(a)形成多个连接产物，其中所述连接产物中的单独的成员通过将无细胞DNA多核苷酸与多核苷酸复合体的单链衔接子连接而形成，其中所述多核苷酸复合体包含与无细胞DNA多核苷酸杂交的捕获探针的第一区段和与单链衔接子杂交的所述捕获探针的第二区段，其中单独的衔接子包含独特的条形码序列；(b)将所述多个连接产物进行环化以产生多个环状靶多核苷酸；(c)生成多个多联体，其中所述多个多联体中的单独的多联体通过延伸根据序列互补性与靶多核苷酸杂交的第一引物而形成；(d)由所述多联体生成多个延伸产物，其中所述多个延伸产物中的单独的延伸产物通过延伸根据序列互补性与多联体杂交的第二引物而形成；(e)对多个所述延伸产物进行测序以产生测序读取；以及(f)当(i)在含有至少出现两次的序列差异的延伸产物的测序读取中检测到序列差异，并且(ii)所述序列差异在具有不同条形码序列的至少两个不同的测序读取中出现时，将测序读取与参考序列之间的序列差异鉴定为所述序列变体。