[发明专利]人ADAM15去整合素区域蛋白的制备方法与应用

摘要

本发明涉及人ADAM15去整合素区域蛋白的可溶性重组表达及应用。该制备方法包括以下具体步骤合成ADADM15去整合素区域基因序列；构建pET‑22b‑Sumo‑ADAM15表达载体；培养工程菌；获得重组ADAM15去整合素区域蛋白。本发明制备得到具有抗肿瘤作用的ADAM15的去整合素区域蛋白，分子量小，利于采用原核系统进行融合表达。通过人ADAM15去整合素结构域基因与Sumo融合，蛋白表达量明显升高，可溶性蛋白的含量大大增加，获得纯度大于95％的人ADAM15去整合素结构域蛋白，并用于抗肿瘤活性研究。且利于获得高表达量的ADAM15去整合素区域，具有良好的市场前景和经济效益。

主权项

人ADAM15去整合素区域蛋白的制备方法，其特征在于：包括以下具体步骤：⑴.合成ADADM15去整合素区域基因序列根据GenBank登录的人ADAM15去整合素区域氨基酸序列(AAS72995.1)，依据大肠杆菌偏好密码子对ADAM15去整合素区域碱基序列进行改造，通过PCR法或化学合成法获得编码ADAM15去整合素区域基因序列；⑵.构建pET‑22b‑Sumo‑ADAM15表达载体分别以SUMO和ADAM15的去整合素区域基因序列为模板，设计引物，并通过RCR扩增，得到两段基因序列，再将两段基因序列连接一起，经酶切与表达载体pET‑22b连接，获得重组表达载体pET‑22b‑ADAM15；⑶.培养工程菌将步骤⑵中构建的重组表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)，提取单克隆并接种到培养基中，IPTG诱导表达后进行电泳和免疫印迹操作，通过对培养条件优化，依据SDS‑PAGE分析结果，选取高表达量的工程菌，进行扩大培养；⑷.获得重组ADAM15去整合素区域蛋白诱导表达并收集步骤⑶中的发酵菌体，超声破碎，离心收集上清，通过Ni‑NTA和Sephadex G25进行纯化，得到含有SUMO‑ADAM15的融合蛋白，加入Sumo蛋白酶进行酶切反应，酶切后的融合蛋白进行Ni‑NTA亲和层析，经过洗涤、洗脱、脱盐，得到纯化后的人ADAM15的去整合素区域蛋白。