[发明专利]一种片段法固液结合制备替度鲁肽的方法

摘要

本发明属于多肽合成领域，涉及一种固液结合制备替度鲁肽的方法，本发明采用液相方式合成部分短肽片段，再以所合成的短肽片段进行投料，减少了14步固相偶联反应，大幅提高了偶联效率，避免了多个位点缺失肽的生成，从原料角度上杜绝了特殊工艺杂质的生成，最终目标肽纯度达到70％以上，精肽总体收率达到45.08％。与现有技术相比，本发明合成路线简单，固相偶联步数少，解决了肽序过长偶联困难，容易产生缺失肽的难题，同时兼顾了避免重点杂质生成，且液相合成片段技术成熟，物料成本低，能够进行工业大规模生产。

主权项

一种片段法固液结合制备替度鲁肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)液相条件下合成所需短肽片段：Fmoc‑His(Trt)‑Gly‑OH，Fmoc‑Asp(OtBu)‑Gly‑OH，Fmoc‑Ser(tBu)‑Phe‑OH，Fmoc‑Glu(OtBu)‑Met‑OH，Fmoc‑Thr(tBu)‑Ile‑Leu‑OH，Fmoc‑Asn(Trt)‑Leu‑Ala‑Ala‑OH，Fmoc‑Asp(OtBu)‑Phe‑Ile‑OH，Fmoc‑Trp(Boc)‑Leu‑Ile‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑Ile‑OH；(b)以Wang Resin或CTC树脂为固相载体，在偶联剂存在下，依次与Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH，Fmoc‑Thr(tBu)‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑Ile‑OH，Fmoc‑Thr(tBu)‑OH，Fmoc‑Gln(Trt)‑OH，Fmoc‑Trp(Boc)‑Leu‑Ile‑OH，Fmoc‑Asn(Trt)‑OH，Fmoc‑Asp(OtBu)‑Phe‑Ile‑OH，Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH，Fmoc‑Asn(Trt)‑Leu‑Ala‑Ala‑OH，Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH，Fmoc‑Thr(tBu)‑Ile‑Leu‑OH，Fmoc‑Asn(Trt)‑OH，Fmoc‑Glu(OtBu)‑Met‑OH，Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH，Fmoc‑Ser(tBu)‑OH，Fmoc‑Ser(tBu)‑Phe‑OH，Fmoc‑Asp(OtBu)‑Gly‑OH，Fmoc‑His(Trt)‑Gly‑OH偶联，得侧链保护的替度鲁肽肽树脂，其结构如下：Fmoc‑His(Trt)‑Gly‑Asp(OtBu)‑Gly‑Ser(tBu)‑Phe‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Asn(Trt)‑Thr(tBu)‑Ile‑Leu‑Asp(OtBu)‑Asn(Trt)‑Leu‑Ala‑Ala‑Arg(Pbf)‑Asp(OtBu)‑Phe‑Ile‑Asn(Trt)‑Trp(Boc)‑Leu‑Ile‑Gln(OtBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Ile‑Thr(tBu)‑Asp(OtBu)‑Resin；(c)替度鲁肽肽树脂经过裂解，纯化，冻干得到替度鲁肽精肽。