[发明专利]一种分子标签核酸检测方法

摘要

本发明公开了一种分子标签核酸检测方法，包括以下步骤(1)待测核酸DNA末端修复、加A；(2)产物和带有多个分子标签的DNA接头连接；(3)使用通用引物对连接产物进行扩增；(4)扩增产物和捕获探针进行杂交；(5)捕获产物用带有样本识别作用的分子标签引物进行扩增，最终产物通过高通量测序进行检测。分析方法为，综合分子标签、DNA片段的起始位置双重校正因素均一化测序结果，从而得到真实的突变、脱氧核糖核苷酸多态性(SNP)定性、定量分析结果。本发明可供高通量测序仪检测的测序文库，可定性定量检测核酸片段中的突变、SNP情况。

主权项

一种分子标签核酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)待测脱氧核糖核酸(DNA)中加入DNA末端补平酶和dNTP，补平DNA末端，并在DNA的3’端增加碱基A；2)直接往步骤1反应体系中加入DNA连接试剂，使步骤1所得产物与带有多个分子标签的DNA接头连接；3)使用通用引物进行PCR扩增；4)将步骤3所得扩增产物和捕获探针进行杂交，得到捕获产物；5)捕获产物用带有样本识别作用的分子标签引物进行扩增，最终产物用于高通量基因测序；6)测序后，通过接头两端序列可以获知DNA两端在染色体的起始位置，综合分子标签、DNA片段的起始位置双重校正因素得出测序结果：1.标签序列一致，DNA起始位置一致的为一个来源的DNA；2.标签一致，起始位置不一致的为不同模板DNA；3.标签不一致，起始位置一致为不同模板DNA；4.标签不一致，起始位置不一致为不同模板来源DNA。