[发明专利]一种基于双抗体夹心法检测雌酚和双酚A的方法

摘要

本发明公开了一种基于双抗体夹心法检测雌酚和双酚A的方法。所述的方法为首先制备表面修饰纳米金‑巯基乙酸‑己烷雌酚单克隆抗体的电化学免疫传感器，然后采用双抗体夹心法对待测样品中的雌酚或双酚A进行检测，通过相关数据的分析与推导，即可得到雌酚或双酚A的浓度。本发明提供的方法检测己烯雌酚的检测限为0.06ng/mL，线性范围为0.5～1000ng/mL；检测己烷雌酚的检测限为0.052ng/mL，线性范围为0.5～1000ng/mL；检测己二烯雌酚的检测限为0.047ng/mL，线性范围为0.5～500ng/mL；检测双酚A的检测限为0.037ng/mL，线性范围为0.5～500ng/mL。本发明所述的检测方法快速、高效、灵敏度高，具有很低的检测限和较宽的线性范围。

主权项

一种基于双抗体夹心法检测雌酚和双酚A的方法，包括以下步骤：1)纳米金‑巯基乙酸‑己烷雌酚单克隆抗体修饰的电化学免疫传感器的制备：先将纳米金颗粒通过电化学还原法沉积到处理好的玻碳电极表面，然后通过自组装法将巯基乙酸修饰到纳米金颗粒表面，最后采用活化羧基法将己烷雌酚单克隆抗体偶联到电极表面修饰的纳米金颗粒上，制得电化学免疫传感器；2)标准溶液的配制：配制含有雌酚或双酚A的磷酸缓冲溶液，作为标准溶液，将含有浓度为0的雌酚或双酚A的标准溶液作为空白标样；3)工作曲线的建立：首先将步骤1)所述电化学免疫传感器浸入步骤2)所述标准溶液中孵育，孵育后用磷酸缓冲溶液冲洗电化学免疫传感器，然后将其浸入含有0.5mg/L的己烷雌酚单克隆抗体的溶液中进行孵育，之后以磷酸缓冲溶液冲洗，再将其在K3[Fe(CN)6]溶液中进行差分脉冲伏安扫描，记录其响应电流；空白标样对应的响应电流记为I0，含有雌酚或双酚A标样的响应电流记为Ix，响应电流的变化值ΔI等于Ix与I0之差的绝对值；将所述ΔI与标准溶液中雌酚或双酚A浓度的对数值lgC绘制成ΔI‑lgC工作曲线，采用线性回归法得到ΔI‑lgC线性回归方程；4)雌酚和双酚A的测定：配置含有待测样品的磷酸缓冲溶液，按照与步骤3)相同的方法对所述免疫传感器进行孵育和差分脉冲伏安扫描，记录响应电流；根据响应电流的变化值ΔI和ΔI‑lgC线性回归方程，得到雌酚和双酚A的含量。