[发明专利]丙酮酸工业量产发酵工艺

摘要

本发明公开了一种丙酮酸工业量产发酵工艺，该工艺包括光滑球拟酵母的平板培养、茄瓶培养、摇瓶培养、一级种子罐培养进而进行一百五十立方发酵罐进行工业化量产发酵工艺及培养基具体构成成分及比例；该工艺填补了丙酮酸工业量产发酵尤其适用于一百五十立方的大型发酵罐进行发酵生产的工艺空白，不仅发酵周期缩短至56h，产率也同样是获得较高收益，并有效的解决了菌种对发酵液饱和丙酮酸的内耗和转化，保证了产品收益和质量。

主权项

丙酮酸工业量产发酵工艺，其特征是，所述工艺包括以下步骤：(1)平板培养：A.平板培养基(g/L)：葡糖糖浆3‑4、大豆蛋白胨3‑4、牛肉膏蛋白胨琼脂3‑4、碳酸钙0.5‑1、原水溶解，PH自然，121℃‑124℃15min灭菌备用；B.光滑球拟酵母于平板培养基内，平板倒置培养皿中28℃‑30℃培养，培养时间15h‑20h后；(2)茄瓶培养：a.茄瓶培养基(g/L)：葡糖糖浆13‑14、大豆蛋白胨11‑12、牛肉膏蛋白胨琼脂10‑12、碳酸钙2‑2.5、氯化铵0.3‑0.5、原水溶解，PH自然，121℃‑124℃15min灭菌备用：b.在无菌室内严格按无菌操作，从保存平板上挑单菌落涂布在茄瓶固体培养基上；c.培养条件：28℃‑30℃，培养时间15h‑20h后；d.将茄瓶放置1℃‑4℃的冰箱内存储备用；(3)种子摇瓶培养：I.摇瓶培养基(g/L)：葡糖糖浆17‑18.5、大豆蛋白胨13.5‑15.5、碳酸钙2.5‑4.5、氯化铵0.5‑0.8、氯化镁0.32‑0.48、磷酸氢二钾0.2‑0.4、原水溶解并用浓度为1.5mol/L HCL调节培养基初始PH为5‑6，121℃‑124℃15min灭菌备用；II. 3000ml或5000ml的三角瓶或钢瓶二十至三十个，在无菌室内用灭过菌的接种铲，从培养好的茄瓶内铲取菌台接到500ml的三角瓶或钢瓶中；接种量为600ml/瓶‑1000ml/瓶；培养温度为28℃‑30℃，培养时间22h‑24h；(4)一级种子培养：①一级种子培养基(g/L)：葡糖糖浆20‑25、大豆蛋白胨16.5‑18.5、碳酸钙6.5‑8.5、氯化铵1.5‑2.8、氯化镁1.32‑3.48、磷酸氢二钾1.2‑2.4、原水溶解并用浓度为1.5mol/L HCL调节培养基初始PH为5‑6，121℃‑124℃15min灭菌备用；②采用800L种子罐3‑5个；种子摇瓶的合拼至三角钢瓶内，在无菌环境下对种子罐进行接种操作，接种量为2000ml/罐‑3000ml/罐；③培养条件：培养温度28℃‑30℃，1‑6h通气量比1∶1，6h以后至种子成熟通气量比：1∶4，罐压维持在0.03MPa‑0.05MPa；④种子成熟的标准：OD值在40‑50之间；(5)一百五十立方发酵罐培养：第一.发酵培养基(g/L)：葡萄糖150‑200、磷酸氢二钾5‑10、氯化镁0.9‑1.5、氯化铵8.5‑9.5、碳酸钙20‑25、醋酸钠6‑8、消泡剂0.01‑0.02、微量元素液3‑5mL、维生素液3‑5mL，PH用浓度为40mol/LHCL调至5.0‑5.5，121℃‑125℃连续灭菌；第二.培养条件：培养温度28℃‑30℃，1‑6h通气量比1∶1，搅拌转速100r/min‑150min；6h‑12h通气量比：1∶2，搅拌转速200r/min‑350min；12h‑30h通气量比：1∶3，搅拌转速400r/min‑500min；30h以后通气量为1∶4，搅拌转速500r/min‑700min；40h‑56h搅拌转速800r/min‑1000r/min；罐压维持在：0.03MPa‑0.05MPa。