[发明专利]高纯度鸡前体肌内脂肪细胞的分离纯化及构建其与肌卫星细胞共培养体系的方法

摘要

本发明涉及一种高纯度鸡前体肌内脂肪细胞的分离纯化及构建其与肌卫星细胞共培养体系的方法，包括将鸡胸肌组织剪成肉糜，用I型胶原酶消化后离心；吸取上层成熟肌内脂肪细胞，接种于培养瓶，去分化处理，最终获得鸡前体肌内脂肪细胞；将离心后下层细胞沉淀重悬，差速贴壁纯化细胞，得到高纯度的肌卫星细胞，将前体肌内脂肪细胞和肌卫星细胞分别接种于transwell小室或配套的培养板，构建共培养体系。该发明方法突破了一直以来无法单独分离纯化鸡前体肌内脂肪细胞的技术瓶颈，可应用于量化模拟鸡肌肉组织，体外精准研究鸡肌内脂肪细胞与肌细胞之间的相互影响关系及分子调控机理，以及相关营养素或药物的筛选研发。

主权项

一种高纯度鸡前体肌内脂肪细胞的分离纯化及构建其与肌卫星细胞共培养体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌条件下取材鸡胸肌组织，去掉可见血管和筋膜，剪至1mm3大小肉糜，加入含1％双抗的PBS缓冲液静置，待组织样品沉淀后，弃上层液和漂浮组织，加入0.1％I型胶原酶消化后，再加入与反应体系等体积的含10％FBS的DMEM/F12培养基中止消化；(2)将细胞悬液过滤，收集滤液离心后，吸取上层成熟脂肪细胞，接种于细胞培养瓶中，使用含10％FBS的DMEM/F12培养基去分化状态下培养10‑14天；出现前脂肪细胞形态时，更换培养基，继续培养至前脂肪细胞长满培养瓶，得到高纯度的肌内前脂肪细胞；(3)将步骤(2)离心后所得细胞沉淀用含10％FBS的DMEM/F12培养基重悬，再离心、弃上清，再次重悬细胞并接种于培养皿中，使用含10％FBS的DMEM/F12培养基培养；利用细胞差速贴壁法进一步筛选，得到纯化的肌卫星细胞；(4)将肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞分别接种于transwell小室或配套的培养板中，共同在DMEM/F12培养基中培养，即可获得高纯度的鸡前体脂肪细胞和肌卫星细胞的共培养体系。