[发明专利]一种提高枯草芽孢杆菌发酵液中α‑淀粉酶活的方法

摘要

本申请属于生物发酵工程技术领域，具体涉及一种提高枯草芽孢杆菌发酵液中α‑淀粉酶活的方法。该方法通过采用基因工程方法对枯草芽孢杆菌菌株基因组进行改造实现，具体包括PCR克隆扩增sdpBC部分序列DNA、酶切和连接、转化、筛选并鉴定、同源单交换重组质粒转化枯草芽孢杆菌168、检测鉴定等步骤。本申请以生理及转化背景比较清楚、并已经完成序列测定的枯草芽孢杆菌168菌株作为研究示例，通过同源重组的方法，对芽孢形成延迟蛋白基因sdpC进行插入突变。初步研究表明，通过该方法所获得的改造后的菌株，其活菌数及α‑淀粉酶活均得到了较好提升，表现出较好的应用价值，同时也为其他菌株改造奠定了应用基础。

主权项

一种提高枯草芽孢杆菌发酵液中α‑淀粉酶活的方法，其特征在于，该方法通过采用基因工程方法对枯草芽孢杆菌菌株基因组进行改造实现，包括如下步骤：（1）设计引物，PCR克隆扩增sdpBC部分序列DNAPCR扩增时引物序列设计如下：sdp F：5’‑CGGAATTCTAAAGAGTGGGCAGAAGGAAC‑3’，sdp R：5’‑CGGGATCCTTTACTAACTTTTTACCTTCTGT‑3’；以枯草芽孢杆菌168菌株基因组DNA为模板，进行PCR扩增；（2）酶切和连接将步骤（1）中的PCR扩增产物与质粒pMUTIN4，分别采用EcorI和BamHI进行双酶切；回收酶切产物；对所回收的酶切产物进行连接；（3）转化、筛选并鉴定将步骤（2）中的连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取阳性转化子进行扩增培养，并提取质粒进行鉴定，鉴定正确的重组质粒保存备用；（4）将所构建的同源单交换重组质粒转化枯草芽孢杆菌168，并检测鉴定将步骤（3）中所构建重组质粒转化枯草芽孢杆菌168菌株，进一步进行检测鉴定，确定转化后的枯草芽孢杆菌菌株构建正确。