[发明专利]在酵母菌中实现高准确率定点基因敲除的方法有效
| 申请号： | 201710017243.X | 申请日： | 2017-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN106701607B | 公开（公告）日： | 2020-05-08 |
| 发明（设计）人： | 柳永;刘士旺;鲍文娜 | 申请（专利权）人： | 浙江科技学院 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 杭州天昊专利代理事务所(特殊普通合伙) 33283 | 代理人： | 向庆宁 |
| 地址： | 310023 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供一种在酵母菌中实现高准确率定点基因敲除方法，采用聚合酶链式反应或全基因合成的方法获得目标敲除基因上下游序列后，将上下游序列按与原基因相反方向连接，并插入到载体质粒上构建环状克隆载体，对环状克隆载体进行线性化处理得到线型双链DNA，将线型双链DNA经由5’→3’核酸外切酶处理，形成线型3’突出长粘端双链DNA后转化酵母菌细胞。本发明借助特殊的外源DNA结构类型，在酵母菌中实现高准确率定点基因敲除。定点基因敲除准确率可达到45～92％，能够大幅减少酵母菌定点基因敲除工作量，在酵母菌功能基因研究及基因工程菌株构建等方面具有较大应用潜力。 | ||
| 搜索关键词： | 酵母菌 实现 准确率 定点 基因 方法 | ||
【主权项】：
在酵母菌中实现高准确率定点基因敲除的方法，其特征在于，采用聚合酶链式反应或全基因合成的方法获得目标敲除基因上下游序列后，将上下游序列按与原基因相反方向连接，并插入到载体质粒上构建环状克隆载体，对环状克隆载体进行线性化处理得到线型双链DNA，将线型双链DNA经由5’→3’核酸外切酶处理，形成线型3’突出长粘端双链DNA后转化酵母菌细胞。
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