[发明专利]一种异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法

摘要

本发明公开了一种异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法，包括如下步骤：取斑鳜精液用精子保存液冷冻保存稀释后置于紫外线下照射，使精子遗传失活；失活的精子与翘嘴鳜卵子混合受精，启动卵子雌核发育；卵子受精后转移到淡水中进行冷体克处理，使染色体组加倍，产生异源雌核发育二倍体；将翘嘴鳜雌核发育二倍体卵转入养殖孵化用水中，室温孵化，按普通翘嘴鳜苗培育方法管理，即获得翘嘴鳜雌核发育二倍体鱼苗。本方法诱导产生的翘嘴鳜后代可加速优良基因纯合化，使优良的遗传性状得以迅速固定，抗病力显著增强。该方法条件易得、有助于今后获得生长速度较普通雄性翘嘴鳜快约20％的全雌性翘嘴鳜群体，具有很大的育种潜力和应用价值。

主权项

一种异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法，其特征在于，其主要步骤如下：S1：冷冻保存斑鳜异源精子：采用Hanks冷冻稀释液对斑鳜精子进行冷冻低温(‑24℃)保存，保存期为24h。解冻时，将冷冻精液管在25℃水浴中解冻备用；S2：班鳜精子的遗传失活：解冻后的斑鳜精液，按1：4的比例经Hanks冷冻液稀释后放入一个直径10cm的培养皿中，在冰盒上手动摇匀后连同冰盒一起放置在水平摇床上，然后用两根15W UV紫外照射管充分照射25分钟，照射距离17cm；照射后，将灭活的精液虹吸至一个5mL的Ep管中，放入冰盒中保存；S3：获得翘嘴鳜的卵子：2龄以上的性成熟雌鱼通过注射外源催产激素发情后，采用干法将卵子挤入干燥的器皿中，放入冰盒中保存；S4：启动卵子雌核发育：将S2得到的遗传失活的翘嘴鳜精子与S3得到的翘嘴鳜成熟卵子摇匀混合受精，受精时间30s；S5：卵子单倍体染色体组加倍：受精后，转移到淡水中进行冷休克处理，水温4℃，冷休克处理时间约20～25min，得到二倍体卵；S6：将S5所得到的二倍体卵转入方形孵化槽中孵化，水温25℃，按普通翘嘴鳜苗培育方法管理，得到翘嘴鳜雌核发育二倍体鱼苗，二倍体雌核发育鱼苗的诱导率为10～25％；S7：用微卫星标记鉴定雌核发育鱼苗。