[发明专利]一种快速筛选sgRNA的基因敲除试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201710019880.0 | 申请日： | 2017-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN106591366A | 公开（公告）日： | 2017-04-26 |
| 发明（设计）人： | 卿志荣;郑帮;郭帅;修朝阳 | 申请（专利权）人： | 上海睿玻生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/867 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200233 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种快速筛选sgRNA的基因敲除试剂盒及方法。其中试剂盒包括盒体、试剂A、试剂B。该试剂盒利用含有萤火虫萤光素酶全长编码序列与绿色荧光蛋白C端融合获得的pCAG‑mCherry‑Luc质粒，并将靶向基因组序列插入绿色荧光蛋白起始密码子前，最终将该质粒与sgRNA以及CRISPR‑Cas9的表达质粒共同转染HEK293FT细胞，通过观察红色荧光蛋白亮度和荧光素酶活力检测从而快速的定性或定量测定sgRNA介导基因组修饰活性，并采用该领域常规方法验证sgRNA筛选系统在慢病毒系统中的有效性。本发明的优点在于可以简单、快速构建任何靶基因的模拟基因组，并且更快速、简便评价sgRNA活性且精确定量其sgRNA活性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 筛选 sgrna 基因 试剂盒 方法 | ||
【主权项】：
一种快速筛选sgRNA的基因敲除试剂盒及方法，其特征在于，所述试剂盒包括：用于快速测定sgRNA介导基因组修饰活性的质粒载体pCAG‑mCherry‑Luc；用于快速测定sgRNA介导基因组修饰活性的质粒载体lentiCRISPRv2。
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