[发明专利]猪细小病毒的病毒样颗粒的制备及用途在审
| 申请号： | 201710029075.6 | 申请日： | 2017-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN106801041A | 公开（公告）日： | 2017-06-06 |
| 发明（设计）人： | 郭慧琛;孙世琪;宋品;董虎;常艳燕;魏衍全;张韵;茹嘉喜;刘湘涛;殷宏 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N7/04 | 分类号： | C12N7/04;A61K39/23;A61P31/20;G01N33/569 |
| 代理公司： | 兰州振华专利代理有限责任公司62102 | 代理人： | 张晋 |
| 地址： | 730046 甘*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明公开一种猪细小病毒的病毒样颗粒、其制备方法及应用。本发明的猪细小病毒的病毒样颗粒的制备方法是对猪细小病毒VP2基因进行优化，得到优化的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的猪细小病毒VP2基因，将优化的VP2基因插入到插入载体pSMK中得重组pSMK‑VP2质粒，将重组质粒转化到大肠杆菌中得重组菌，经IPTG诱导表达，收集菌体，纯化重组蛋白，再将纯化后的重组蛋白进行体外组装，得猪细小病毒病毒样颗粒。本发明的猪细小病毒病毒样颗粒可在制备用于预防猪细小病毒引起疾病的疫苗中的应用，也可在制备用于检测猪细小病毒的检测试剂中的应用。 | ||
| 搜索关键词： | 细小 病毒 颗粒 制备 用途 | ||
【主权项】：
猪细小病毒的病毒样颗粒制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）对猪细小病毒VP2基因进行优化，得到优化的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的猪细小病毒VP2基因；（2）重组质粒的构建：将优化的VP2基因插入到载体pSMK中，转化大肠杆菌JM109感受态细胞，提取阳性质粒即为重组pSMK‑VP2质粒；（3）重组VP2蛋白的表达：将pSMK‑VP2转化到大肠杆菌，得到重组菌；（4）猪细小病毒病毒样颗粒的制备：将获得的重组菌，培养至菌液OD600值为1.0左右，加入异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）至终浓度为0.05 mM，在220r/min、20℃继续过夜培养，收集菌体纯化重组蛋白，再将重组蛋白纯化后进行体外组装，得到猪细小病毒病毒样颗粒。
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