[发明专利]基于凝血酶和凝血因子的双靶点抗凝活性物质的液相色谱-质谱筛选方法有效
| 申请号： | 201710029357.6 | 申请日： | 2017-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN106814153B | 公开（公告）日： | 2020-06-16 |
| 发明（设计）人： | 许哲;刘若男;管华诗 | 申请（专利权）人： | 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/06 | 分类号： | G01N30/06;G01N30/02 |
| 代理公司： | 青岛合创知识产权代理事务所(普通合伙) 37264 | 代理人： | 王晓晓 |
| 地址： | 266061 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基于凝血酶和凝血因子的双靶点抗凝活性物质的液相色谱‑质谱筛选方法。具体包括：建立靶标酶酶反应产物的定量方法；获得用于筛选的酶反应溶液；进行高效液相‑质谱联用分析。本发明保证了所述筛选方法的准确度高、干扰少、灵敏度高和重现性强；质谱方法的自动化进样使得该筛选方法可以连续分析大量的样品，使该方法兼具高通量的特点。该筛选方法，可以用于大批量样品库的筛选，更具实用性，且筛选出的活性物质作用靶点明确，为后续药物的开发奠定了理论基础。本发明可以降低干扰、特异性高，操作简便、节约时间，有效的提高筛选效率和筛选成功率。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 凝血酶 凝血 因子 双靶点 抗凝 活性 物质 色谱 筛选 方法 | ||
【主权项】：
基于凝血酶和凝血因子的双靶点抗凝活性物质的液相色谱‑质谱筛选方法，其特征在于所述筛选方法包括如下步骤：（1）配制靶标酶酶反应产物的系列标准溶液，进行高效液相‑质谱联用分析，建立靶标酶酶反应产物的定量方法；（2）将凝血酶和凝血因子及其对应的底物与待筛选化合物混合后，得到用于药物筛选的酶反应溶液，30‑50 ℃下反应直至反应完成；去离子水为空白对照；（3）然后进行高效液相‑质谱联用分析：测得所述靶标酶酶反应产物的峰面积，以抑制率为评价标准：抑制率=1‑(待筛选化合物的质谱响应峰面积/空白对照的质谱响应峰面积)，筛选出具有抗凝作用的活性物质。
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