[发明专利]一种禽流感新城疫核酸液相芯片高通量检测方法在审
| 申请号： | 201710030383.0 | 申请日： | 2017-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN106591495A | 公开（公告）日： | 2017-04-26 |
| 发明（设计）人： | 詹爱军;陈枝楠;谢晋雄;张婷;陈勇;孙洁 | 申请（专利权）人： | 深圳市检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所11569 | 代理人： | 王加贵 |
| 地址： | 518000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种禽流感新城疫核酸液相芯片高通量检测方法，包括设计ND病毒、H9、H5 AIV用探针Probe、上下游引物P1、P2以及探针反向互补序列(RC‑Probe)，并将所述探针与荧光编码微球偶联；提取样品RNA用RT‑PCR方法扩增；将与病毒探针偶联的荧光编码微球，与RT‑PCR产物进行杂交，通过比较待测样品的荧光强度中位值与空白对照荧光强度中位值，确定待测样品中是否感染计新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒和/或H5亚型禽流感病毒。本发明的方法灵敏度高，多毒株PLex快速高通量检测方法检测H5基因的检测灵敏度为10‑5，相当于3000ELD50；所建方法快速，禽流感分型检测可在5h内完成；所建方法特异性强，通过两个引物和一个探针来确保各个毒株的特异性，各个毒株之间交叉反应性低，该方法与其他病原体之间也无非特异性反应。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 禽流感 新城 核酸 芯片 通量 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种禽流感新城疫核酸液相芯片高通量检测方法，包括以下步骤：1)设计新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒与H5亚型禽流感病毒的检测用探针、反向互补序列、引物的序列，并将所述探针与荧光编码微球偶联；2)提取待测样品中的新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒与H5亚型禽流感病毒的RNA，使用RT‑PCR方法扩增；3)将步骤1)获得的所述与探针偶联的荧光编码微球，与步骤2)的病毒RT‑PCR产物进行杂交，通过比较待测样品的荧光强度中位值与空白对照荧光强度中位值，确定待测样品中是否感染鸡新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒和/或H5亚型禽流感病毒。
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