[发明专利]一种灰霉病菌菌种的长期保存方法有效
申请号: | 201710034045.4 | 申请日: | 2017-01-10 |
公开(公告)号: | CN106754425B | 公开(公告)日: | 2020-11-27 |
发明(设计)人: | 王忠文;张君成;曾东强 | 申请(专利权)人: | 广西大学 |
主分类号: | C12N1/14 | 分类号: | C12N1/14;C12N1/04 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 530004 广西壮族*** | 国省代码: | 广西;45 |
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摘要: | 本发明公开了一种灰霉病菌菌种的长期保存方法,利用灰霉病菌分生孢子能在水中长时期保持活力的生存特性,采用灰霉病菌分生孢子作为菌种的存贮菌体,长期保存灰霉病菌菌种,长期保存方法的步骤如下:1.分生孢子的制备培养;2.分生孢子的净化;3.灰霉病菌菌种的存贮;4.灰霉病菌菌种复活培养。本发明的优点是:1)菌种存活期超过2年,保存时间长;不需要每年转管培养的菌种护理工作,也减小菌种变异机率。2)用可密封的管具装盛菌种,保存期间污染机率小,而且管具体积小,贮存菌种需要空间少,便于管理。 | ||
搜索关键词: | 一种 病菌 菌种 长期 保存 方法 | ||
【主权项】:
一种灰霉病菌菌种的长期保存方法,其特征在于,利用灰霉病菌分生孢子能在水中长时期保持活力的生存特性,采用灰霉病菌分生孢子作为菌种的存贮菌体,长期保存灰霉病菌菌种;长期保存方法的步骤如下:1)分生孢子的制备培养:采用普通三角瓶作制备培养分生孢子的器具;以马铃薯葡萄糖培养基作产孢培养基,该培养基的配比为:马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000mL;将灰霉病菌的菌丝体移植入三角瓶装的培养基面上;在适合的温度下培养,直至菌落上形成茂密的菌丝及分生孢子;2)分生孢子的净化:用无菌水洗涤步骤1)培养获得菌落,得到初步的分生孢子液;通过纱布过滤处理去除该初孢子液中的菌丝碎段;再通过离心沉淀处理,去除该孢子液中的培养基组分及菌体代谢物,获得的离心沉淀物是较为纯净的分生孢子,以该纯净的分生孢子作为菌种保存的菌体形态;3)灰霉病菌菌种的存贮:用无菌水将步骤2)的分生孢子沉淀重新悬浮,搅动悬浮液使分生孢子充分分散,再用无菌水将该孢子悬浮液适当稀释,以该孢子液作为灰霉病菌菌种的保存液;将该孢子液分装入灭菌的冷冻管中,并转移到20℃环境下存放;4)灰霉病菌菌种复活培养:取出步骤3)贮存菌种保存液的冷冻管,充分振荡使分生孢子悬浮并分散均匀,用微量移液器取少量分生孢子液转移到常用培养基上,在合适温度下培养,分生孢子恢复萌发生长,并形成生活态的菌丝体菌落。
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